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干货分享 | ATAC-seq 和 Hi-C 样本制备

干货分享 | ATAC-seq 和 Hi-C 样本制备

作者: ee00dc6faab7 | 来源:发表于2021-11-01 18:13 被阅读0次

    一. ATAC-seq

    1. 冻存细胞样本

    (1)取出培养的悬浮细胞,显微镜下观察细胞生长状态是否良好,是否有细菌污染,然后用PBS洗涤并离心弃上清,细胞沉淀进行冻存操作(贴壁细胞需要消化为悬浮细胞);

    (2)用冻存液重悬细胞沉淀,移至冻存管(提前配置细胞冻存液,要避免新配置的冻存液过热而损伤细胞);

    (3)冻存细胞解冻后,常规需要有5万个状态良好的细胞开展实验,因此建议将50万个细胞用于上述冻存操作;

    (4)随后,将冻存管置于程序降温冻存盒,放在-80度进行梯度降温并暂时保存(严格按照程序降温操作,对细胞造成的损伤降到最低);

    (5)24 h后,将程序降温盒中的细胞样本转移至液氮中保存。

    2. 动物组织样本

    (1)取下新鲜组织,立即剔除结缔组织和脂肪等杂质;

    (2)将组织样本转移至新的离心管中,用预冷的PBS漂洗,直至将组织表面的残留血液冲洗干净;

    (3)用无尘纸擦干水分,如果组织体积较大,应在冰上将组织切成小块,约50 mg/份,之后置于冻存管内;

    (4)将冻存管迅速置于液氮中冷冻30 mins,然后转移至-80度中保存(要注意冻存管密封性和质量)。

    3. 植物组织样本

    (1)从植株取下新鲜幼嫩组织,取材后用清水将材料表面的灰尘或泥土冲洗干净,吸干表面水分;

    (2)如果组织体积较大,应在冰上将组织切成小块或薄片,然后放入合适体积的冻存管或锡箔纸中,每份>200 mg;

    (3)将冻存管或锡箔纸置于液氮中冷冻30 mins,之后保存于-80度。

    二. Hi-C

    1. 细胞样本

    (1)确定细胞无污染,常规每个文库建议培养1x10^6用于甲醛固定(低细胞量可评估);(2)新鲜细胞计数后重悬于完全培养基中,加入甲醛(终浓度2%),室温固定10 mins;

    (3)加入适量甘氨酸溶液,保证甲醛和甘氨酸充分混匀,培养基会由粉红色变为亮黄色,室温终止固定10 mins;

    (4)离心弃上清,然后用PBS洗涤,再置于-80度保存。

    2. 动物组织样本

    (1)组织离体后,用预冷的PBS将组织表面残留洗净;

    (2)用无尘纸擦干水分,在冰上将组织切成小块,约200 mg/份(肝脏、肾脏、脑、肌肉),之后置于冻存管内(低组织量可评估);

    (3)将冻存管放入液氮中冷冻30 mins,然后转至-80度保存。

    3. 植物组织样本

    (1)将幼嫩组织小心清洗干净,避免损伤;

    (2)常规每个文库建议准备1 g幼嫩组织(低组织量可评估);

    (3)用锡箔纸包裹组织,置于液氮中冷冻30 mins,然后转至-80度保存。

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