慢病毒转染悬浮细胞实验方法

（一）慢病毒转染贴壁细胞实验方法

1、慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞以1×105/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×105/孔左右。 2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。 4、继续培养24小时，用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。 5、继续培养。如果慢病毒含有荧光蛋白，一般转染48小时后可见明显荧光表达，72小时后更加明显。如需FACS检测转染效率，可在转染后72-96小时进行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选，可以在转染3-4天后开始加药。

（二）慢病毒转染悬浮细胞实验方法

1、在2×105/ml悬浮细胞中加入polybrene至6 μg/ml和适量病毒，充分混匀。37℃孵育。或者150g室温离心4小时(选作，部分难转染的细胞系采用此步骤可以提高转染效率)。

2、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后(或离心结束后)加入等体积新鲜培养基以稀释polybrene。

3、继续培养3-4天。中间视细胞生长情况可传代或换液。

病毒感染细胞效率较低，一定要注意以下几点：

1.感染时的培养基尽量少些；

2. 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene（储存液浓度为2mg/ml ），可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的，达到自己的研究目的即可。

病毒感染细胞本来效率就较低，整个过程相对复杂难操作，一般一次花费周期至少两三个月，多则几个月到十几个月不等，经费也是几万到十几万。万一实验失败需要重复操作会花费更多的时间和开支。所以有效提高病毒转染效率是病毒转染细胞的关键。北京英格恩生物公司研发合成一种新型纳米聚合物 病毒感染增强试剂(病毒转染试剂) EnvirusTM，具有对病毒吸附和独有的浓缩功能。EnvirusTM通过物理作用将病毒大量富集在细胞表面，大大增加病毒与细胞的接触，最大限度促进病毒感染细胞，可大大提高腺病毒，慢病毒，腺相关病毒，逆转录病毒等病毒的感染效率，并且细胞毒性很小。可以作为实验首选。