买回来的冻干菌种需要复苏,复壮,鉴别后才可以进行传代保存,为什么呢?因为冻干管里的菌种长期在低温环境中菌种能力会衰退,如果不复活,时间长了菌种会出现变异、死亡等问题,所以需要定期进行复活分离再保存
一:复活
消毒液消毒安瓿,用砂石在三分之一处划出刮痕后再消毒一次,把干燥灭菌后的纱布包住安瓿,手用力沿着刮痕处掰开,用无菌吸管吸取0.5ml培养基加入安瓿内摇匀,再全部吸取安瓿内的液体加入培养基中培养观察,如果不长菌,细菌延长至7天,真菌延长至14天
二:复壮
把上诉的菌液加入到合适的培养基中培养,使其能力恢复
三:菌种确认
菌种复壮后需要分离纯化,利用革兰染色法放在显微镜下观察其细胞形态,验证是否是相对应的菌种
四:菌种传代保存
确认其目标菌种后挑取可疑菌加入无菌水中混匀制成菌液,再加入等体积百分之20甘油的TSB大豆液体培养基中,分装保存在-30~-80摄氏度的环境中
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