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2021-12-17-QRTPCR结果的分析

2021-12-17-QRTPCR结果的分析

作者: FFwizard | 来源:发表于2021-12-18 11:12 被阅读0次

PCR 扩增的速率大家都知道,就是简单的指数增长,也就是 1 变 2,2 变 4,4 变 8 以此扩增。数学形式就是 2 的 ct 次方,但是实际过程中的增量应该是(1+e)的 ct 次方,e 是扩增效率也称扩增系数。一般我们都假设 e 为 1。正常的 Q-PCR 我们都会有一个阈值,也就是我们平常说的平台期。


image.png

简单的说在平台期的所有基因扩增的数目是一致的。而唯一有区别的则是 ct 值的不同。Ct 值的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数 (cycle)。所以不难推断出 ct 值越小,反应扩增到达平台期所需循环数越少,目的基因起始含量越高。下面我们用一个公式进行推导过程:(敲黑板,重点!)

PCR 产物量 = 2∧ct * 起始模板量
起始模板量 = PCR 产物量/2∧ct = 起始模板量 * 2∧ - ct

待检基因起始模板量 = PCR 产物量 * 2∧ - ct(待检基因)
内参基因起始模板量 = PCR 产物量 * 2∧ - ct(内参基因)

由于 PCR 产物量是相同的。两式上下相除得:待检基因起始模板量/内参基因起始模板量 = 2∧-【ct(待检基因)-ct(内参基因)】= 2∧-Δct
来自忘了,(抄的)

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