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单细胞测序运用实践--细胞悬液制备经验分享

单细胞测序运用实践--细胞悬液制备经验分享

作者: 生物芯时空 | 来源:发表于2022-03-24 10:23 被阅读0次

    单细胞检测技术的发展将生命科学研究推向了一个全新的维度。基于单细胞技术,我们对生命体的理解,对疾病组织的了解上升到了最基本的单元—细胞。通过对组织中的各类细胞的基因特征检测与分析,增进了我们对细胞的本身特性及细胞与细胞之间互作关系的理解。正是基于单细胞检测技术在各类疾病中的研究运用,使得我们对疾病的发生发展和抗药等的了解更加深入,更加明确,也更能找到最核心、影响最大的某类细胞和基因。可以说,正是单细胞检测技术的发展和运用,极大地加速了科学研究往临床的转化和运用。

    单细胞技术用于肿瘤研究。引自:Cancer Cell. 2020 Apr 13;37(4):456-470.

    虽然我们进行单细胞测序的研究目的不尽相同,但绝大多数研究是以组织样本作为研究材料。目前单细胞测序实验首先要将组织解离为单细胞悬液,再上机进行油包水、建库、测序、数据分析。而我们知道生命体是相当复杂的,以人体为例,人体是由四大组织系统组成的,包括上皮组织、结缔组织、肌肉组织、神经组织。不同组织的细胞构成、细胞特性、细胞间质组成可能有很大的差异。比如,上皮组织由密集的上皮细胞和少量细胞间质构成。结构特点是细胞结合紧密,细胞间质少;结缔组织由细胞和大量细胞间质构成,细胞间质包括基质、细丝状的纤维和不断循环更新的组织液,细胞散居于细胞间质内;肌细胞间有少量结缔组织,并有毛细血管和神经纤维等;神经组织是神经系统的主要组成成分,由神经细胞和神经胶质组成,神经细胞会有很长的突起。

    人体组织分类图

    这些组织差异使得单细胞悬液制备没有统一的protocol,而单细胞测序对单细胞悬液质量要求也比较高。因此需要根据组织类型,甚至是相同组织的不同疾病状态等摸索特定的实验条件,比如组织剪碎方式、酶种类和浓度选择、酶解时间选择、酶解条件选择等等。

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