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BCA测蛋白浓度

BCA测蛋白浓度

作者: 嘉期几许 | 来源:发表于2019-07-16 20:41 被阅读0次
  1. 蛋白标准品配制
    1ml蛋白标准配制液
    20mg蛋白标准(BSA)

    20mg/ml蛋白标准溶液

    稀释40倍。20ul+780ulRIPA

    0.5mg/ml蛋白标准品
    -20度保存
  2. BCA工作液配制
    BCA试剂A:所有孔数*200+200
    B:A/50
    混匀
  3. 96孔板加样。

96板[,1:3]=蛋白标准品+pbs
96板[,4:6]=样品

  • 标准品 + PBS 浓度
    A: 0+20 0
    B: 1+19 0.025
    C: 2+18 0.05
    D: 4+16 0.1
    E: 8+12 0.2
    F: 12+8 0.3
    G: 16+4 0.4
    H: 20+0 0.5
  • 加pr样:若稀释20倍,则1ul样+19ulPBS(样本每孔加20ul, 3个副孔)
  • 加BCA工作液每孔200ul(所有孔都加,蛋白标准品和PBS都要加)
  1. 37度放置30min.

  2. 冷却至室温测A562(浓度梯度 0,25,50,100,200,300,400,500)
    结果取平均值,样本蛋白浓度=测出来的浓度平均值*20

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