支原体10CFU灵敏度标准品 (货号：102-0002)

 

支原体10CFU灵敏度标准品 (货号：102-0002)

用途：

德国Minerva Biolabs公司原装进口的支原体10CFU灵敏度标准品，用于以核酸为基础的支原体检测的功能验证和灵敏度验证。

试验的说明：

根据《欧洲药典》第2.6.7章，对于以核酸为基础的检测方法如PCR，为了取代传统培养的方法，支原体检测的灵敏度需要达到为每ml样本10个集落形成单位（CFU）。对于任何特定的样本基质，这项灵敏度的验证需要作为功能试验的一部分加以完成。

对于大多数细胞培养实验室，根据安全性的法规，存在活的支原体是不可接受的。我们10CFU灵敏度标准品的支原体不是活支原体，可使验证试验安全而可靠的进行。

正如《欧洲药典》第2.6.7章所描述的那样，支原体先在培养基中生长，随后稀释并接种在Hayflick和Frey培养基中，用于确定CFU集落数。在生长的早期对数期进行支原体的收集，以保证活支原体对死支原体的高比例，以及基因组单位对CFU的低比例。所有菌株均来自英国的菌种保藏中心NCTC，并且传代次数很少。相应的NCTC编号和ATCC编号列在试剂表中。

试验的原理：

每管包含10CFU不可逆灭活的支原体。因而支原体不可用于培养法。简要而言，根据欧洲药典第2.6.7章，一个样本是通过添加待测样品的基质而完成制备。

样品在做PCR扩增前，需要先做DNA抽提。正如几个独立实验室检测所示，为了达到最高灵敏度，DNA抽提是必要的。使用我们的支原体DNA提取试剂盒（Venor®GeM Sample Preparation Kit）可以轻松完成DNA抽提。提取的DNA即可直接用于PCR。要符合欧洲药典标准，PCR检测应显示为阳性扩增。

请注意：我们的10CFU灵敏度标准品是依据集落形成单位进行的标定，而非依据基因组拷贝数，正如欧洲药典第2.6.7章也不包含有关DNA含量的详细信息。我们没有提供基因组单位对CFU的比例，因为该比例在不同批次间可能有变化。

试剂表：

试剂盒组分

数量

NCTC编号

ATCC编号

货号

精氨酸支原体

3管

10129

23838

102-1003

口腔支原体

10112

23714

102-2003

鸡败血支原体

10115

19610

102-3003

肺炎支原体

10119

15531

102-4003

关节液支原体

10124

25204

102-5003

发酵支原体

10117

19989

102-6003

猪鼻支原体

10130

17981

102-7003

莱氏无胆甾原体

10116

23206

102-8003

螺原体

10164

27556

102-9003

阴性对照

2管

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10CFU支原体套装（货号102-0003）包含有欧洲药典第2.6.7章列出的各种支原体2管（总共18管）和阴性对照2管。

支原体直接用培养基稀释，保证每个支原体细胞的完整性，随后用10mM Tris缓冲液（pH 8.0）稀释10倍，避免培养基对PCR试验的不良效应。所有样品菌均为冻干形式，以保证产品的稳定性。

支原体在冻干前进行了灭活。支原体的灭活经Hayflick和Frey培养基在37℃（螺原体在30℃培养）培养23天所证实。采用Venor® GeM qEP Mycoplasma Detection Kit进行定量PCR，以监测生长状况。

未开封产品的效期在包装标签上。试剂盒组分必须在2～8℃保存，直到使用。每个批号的产品均可在Minerva厂家网站下载质控证明：www.minerva-biolabs.com

需用户自己提供的耗材和仪器

试剂盒包含的试剂，用于制备有支原体颗粒掺入的样品。任何其他普通实验室仪器和消耗品如PCR试剂，由用户自己提供。

注意事项

10CFU灵敏度标准品只适合体外，由有经验的实验室人员使用。试剂盒不包含有害物质。残留物可以根据当地法规的规定处理弃掉。

试验步骤

所有试剂盒样品在试验开始前，均应放置片刻，达到与室温平衡。

1. 管离心，以收集冻干粉至管底。

2. 每个管中添加1ml你的样品。

3. 室温孵育5分钟。

4. 涡旋振荡10秒，再离心10秒。

5. 使用适当的体积用于DNA抽提。我们推荐使用我们的支原体DNA提取试剂盒（即Venor®GeM Sample Preparation Kit）。

6. 使用适当体积的提好的DNA用于PCR扩增。

阴性对照样品的制备，和支原体灵敏度标准品的制备一样，但它不包含任何支原体颗粒。阴性对照必须用同样的样品基质来溶解，并且采用适当数量的重复管并行操作，也验证试验结果的合理性。

附加说明

顺利使用该产品需要对说明书充分理解。提供的试剂不能和其他批次的试剂混合，但可以作为一个整体使用。试剂必须在效期内使用。任何实验步骤的偏离都可能对实验结果有影响。

附录

产品的有限担保

本保证限定了我们对本产品更换的责任。即不提供任何明确的或默示的保证，包括无任何限制的、对适销性或适合某一特定用途的隐含保证。对于使用中产生的任何直接、间接、随之带来的或偶然出现的损坏，对于使用后的结果或本产品的无法使用，Minerva Biolabs不应承担任何责任。