转录组测序是最常用的组学实验,对全谱基因定量,找到差异表达基因。RNAseq涉及到原始数据,数据质控,基因组比对,差异基因鉴定,差异基因功能富集分析,重要基因如转录因子激酶的靶基因预测等,我们用10讲的时间,全面讲解转录组测序报告,及在上百个项目中遇到的近百个常见问题。
本节视频是第1讲,从测序原始下机数据开始讲起。样品制备到产出测序数据过程,是RNA提取建库和测序的试验环节。在使用Illumina系列的仪器进行测序后,测序下机数据以fastq文件存储,称为raw data(或raw reads),记录了转录组RNA序列的碱基组成信息。
本节内容要点包括:
(1)如何查看fastq文件;
(2)fastq文件的基本格式,每一行的主要信息;
(3)如何在fastq文件中评估碱基质量,代表碱基质量的ASCII值和单碱基测序错误率之间怎样换算;
(4)N碱基代表什么,常说的Q20、Q30等与测序质量间存在怎样的关系,一般它们多少时代表测序质量是合格的;
(5)为什么一个样本对应R1和R2两个fastq文件,什么是双端测序。
视频教程:
纪伟讲测序1-测序原始数据说明
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