二十四型 第1型 增殖

二十四型 第1型 增殖

二十四型 第1型 增殖

24 型的定位：梳理表型相关的知识，包括标志物、研究方法、研究策略、研究思路等内容，所以就相当于是在研 究表型过程中的实验手册。

(一)增殖表型的概述

第一种是体细胞的增殖方式：有丝分裂。

另一种是性生殖细胞所采用的增殖方式：减数分裂。

增殖现象都是普遍存在的

(二)增殖表型如何检测?

从宏观到微观，研究层次可以分为:人群→动物→组织→细胞→分子

(1)分子层面检测增殖表型

1)与增殖相关的分子标志物（应用最广泛）

• MCM (微小染色体维持蛋白）只存在于真核细胞中。只在细胞的增殖期才能检测到，它的表达在 G1/S 转换点达到峰值，在分化期和静息期时，表达缺失。

• 细胞核相关抗原 Ki-67。Ki-67 在细胞的 G0 期不表达， G1 中期到后期出现表达，S 期和 G2 期表达逐渐增加，有丝分裂期达到高峰，细胞分裂后迅速降解。

  • 推测 Ki-67 可以调节细胞周期

  • Ki-67 能和 DNA 或者 RNA 发生相互结合

  • Ki-67 在细胞分裂期参与合成核糖体。

• 增殖细胞核抗原 PCNA（周期素）。在 G0/G1 期几乎没有表达，G1 晚期表达大幅度增加，S 期达到高峰,G2/M 期表达下降。

  • DNA 聚合酶δ的辅助蛋白

  • 参与 DNA 损伤的修复

  • 参与细胞周期的调控

  • 和 p21 相互作用

2)和干细胞相关的分子标志物

CD44 是胰腺癌中肿瘤干细胞常用的分子标志物，因此可以通过检测 CD44 的表达水平，证实胰腺癌中肿瘤干细胞的情况，间接地证实肿瘤细胞增殖能力的强弱。

3)检测抑癌基因

通过 western 或者 qPCR，证实 p53 以及 PTEN 分子表达水平降低，从而间接地说 明肿瘤细胞恶性程度上升，肿瘤的增殖表型也会显著的提升。

(2)细胞层面检测增殖表型

1)直接检测细胞的增殖状态

• MTT 法：通常取 5 个时间点(通常就是 5 天)。把 5 天中每一天的吸光度数据都记录下来，最后形成一条细胞增殖的曲线。通过比较不同处理方式或者不同实验组之间，细胞增殖曲线的高低，就可以判断细胞增殖情况的快慢。替代技术：CCK8 染色实验

• Brdu 染色法：Brdu 是胸腺密啶的衍生物，可以标记活细胞中新合成的 DNA，代替胸腺嘧啶选择性地整合到复制细胞新合成的 DNA 中。演化出：Edu染色法

• RTCA 实时细胞分析仪：实时记录细胞增殖状态，还可以用于细胞黏附、凋亡、转移

2)检测细胞的克隆形成能力

即便缺少细胞之间的交互和信号通路，肿瘤细胞也可以由单独一个细胞，增殖形成大量的子代细胞，最终形成一个细胞克隆。这种现象就被称之为克隆形成能力。评估肿瘤细胞的离体增殖能力的大小以及肿瘤在体外的致瘤能力的大小。

干细胞：“干细胞悬浮成球试验”检测干细胞的增殖能力。

(3)组织层面检测增殖表型

1)检测分子标志物

• 石蜡切片：免疫组织化学 IHC ，检测和增殖相关的分子标志物，比如 PCNA 和 Ki-67。

• 新鲜组织样本

  注意区分癌组织和癌旁组织

  2)细胞形态和组织结构上的差异

  对于组织内部细胞排列顺序和排列结构的检测→肿瘤细胞发生恶性增殖

  (4)动物层面检测增殖表型

  移植瘤动物模型

  总结