2018-05-04

干货：5种常见的PCR误读正解

1.“特异性”和“保真度”意思是相同的

高特异性PCR将只生成针对目标靶点序列的单一扩增产物。

高保真度(即高度准确的) PCR将含有极少量的DNA聚合酶-减少产物中的错误。

2.所有的dNTP都是一样的

要成功完成PCR，反应混合物中应使用高度纯化的dNTP。并非所有供应商均提供PCR级的dNTP，污染的杂质会降低扩增的灵敏度和产物的产量。

3.PCR量越多越好

如果您在琼脂糖凝胶中检测到非特异性的PCR条带，则应减少DNA模板、引物、Taq聚合酶或MgCl2用量，以提高特异性。

4.如果退火温度在45°C至55°C之间，则大多数PCR反应可发生

严格的Tm优化可以获得最高的产量。不恰当的Tm则会导致非特异性产物形成且产量下降。

5.采用任何Taq聚合酶均可

在PCR设置过程中会发生错配或形成引物二聚体，因此应使用热启动Taq聚合酶。在高温下，引物退火的严格性提升，且几乎不会出现错配。