§PCR等

时间段：

9:11-13:02，13:16-17:37

坐标位置：

中国泰安，山东农业大学本部国重楼417室

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任务一：普通PCR

实际操作步骤：

1、体系

模板DNA：1微升

前引物（F）、后引物（R）各0.3微升

酶Mix：10微升

dH⒉O补足（即+8.4微升）

先依据每对引物的点样数配置混合体系足够量，再取19微升点样，然后+1微升模板。

中间引物，片段引物

2、跑PCR

提前预约PCR仪。

12×8的96孔板盖皮套盖，旋转。

变性94℃

退火是引物与模板结合的过程，退火温度依据所使用引物的平均Km值定，用Km-5℃，用小的那个，温度设定尽量不要低于55℃。

延伸72℃，此时Taq酶的活性最高；延伸温度时间设定有要求，拟南芥20s，水稻60s；温度编辑栏设置具体参数。

PCR基本原理

任务二：电泳

1、配制1%的琼脂糖凝胶电泳液

60mL液（可适当多加点）+0.6g琼脂

25×2孔

2、具体注意问题

带手套。

微波炉溶解至无小的晶体。

溶好后移液枪+EB，出现红色即可。

正确接好正负极，DNA在碱性缓冲液中带负电荷，外加电场向正极移动。

记得在一侧空一个格加Marker。

任务三：紫外显影

依据条带位置判断是否跑出了所需要的片断，分析结果。