设计qPCR引物

1.打开Primer3Plus在线网页（https://www.primer3plus.com/）进行设计引物；

2.输入序列（目的基因的CDS的核酸序列）；

输入序列

3.进行产物长度、引物大小等的设定（如图所示）

对产物长度(一般为80-150bp)、引物长度、退火温度及GC含量设定

4.点击pick primers后得到结果；

结果展示

5.利用DNAMAN检测引物是否存在发卡结构：打开DNAMAN软件，点击primer-Load primer-From Input，输入Forward引物；点击Primer-Two Primer Complementarity-Second primer From Input，即可查看引物能否形成发卡结构。

检测结果（一般选择少于四个发卡结构的引物）

6。满足条件的即可确定为比较好的qPCR引物，发送至公司邮箱合成即可。

这只是设计qPCR引物的其中一种方法，大家可以选择自己熟悉的方法进行设计。