细胞增殖实验

1.DNA合成检测——BrdU / EdU检测法

　　细胞在增殖过程中，DNA的倍增，是最显著的变化之一，通过检测DNA量的变化，可判断细胞数量的变化。

　　EdU检测法是BrdU的替代方法，也是目前更广泛适用的方法，RrdU需抗体在破开DNA双联后与抗原分子集合后才能显示，这个处理过程对细胞有损伤，而EdU同样可以代替胸腺嘧啶（T）渗入DNA，但其分子大小只有BrdU的1/500，可以直接在DNA双链形态下与染料分子结合用于检测，无需抗体结合反应，实验过程简单，对细胞损伤小，是新一代基于DNA检测时报增殖的试剂。

2.代谢活性物质检测——MTT、CCK8

　　CCK8中的主要物质WST-8是一种类似于MTT（对细胞有损伤）的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的琥珀酸脱氢酶还原生成橙黄色的、水溶性formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；反之，则颜色越浅。CCK-8对细胞基本无毒性，可进行活细胞动态测定，

3.羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法

　　羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料， CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，子代细胞荧光强度是亲代细胞的一半，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。

4.ATP浓度检测

　　细胞内的ATP是细胞能量的重要来源，其含量与细胞周期和细胞状态关系密切，死细胞或濒临死亡的细胞几乎不含ATP。利用荧光素酶Luciferase及其底物荧光素Luciferin的ATP检测以生物发光为基础，能够为您提供非常灵敏的结果，这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选。

5.细胞增殖相关抗原检测

　　Ki-67,PCNA都是细胞增殖因子，在细胞异常增殖中均有显著的表达差异，是研究肿瘤细胞增殖的重要核抗原。Ki-67,PCNA均与细胞周期密切相关，通过免疫反应检测Ki-67,PCNA可反应肿瘤细胞增殖情况。