美文网首页
单细胞分析(四)——数据读入

单细胞分析(四)——数据读入

作者: 生信小鹏 | 来源:发表于2023-06-10 19:22 被阅读0次

    要做单细胞分析,尤其是从公司拿回数据,或者从公共数据库下载的数据,看起来眼花缭乱的分析结果,首先第一步就是要把数据先读入,才能有后续的结果和分析。

    image.png

    数据应该是什么样子

    首先需要知道数据最终要分析之前应该是一个什么样子,那么我们就把得到数据准备成相应的样子即可。

    image.png

    分析的数据应该是行为基因名称,列是样本(细胞)名称

    然后再对这个再把这个数据,转换成seurat对应的对象,进行后续一系列的分析和操作。

    标准10X数据的基本知识

    barcode信息

    10X Genomics数据中的barcode主要存放两个信息:1)单个细胞的信息;2)单个细胞所属的核酸序列信息。

    在10X Genomics的单细胞测序中,每一个细胞都被分配一个唯一的barcode,用于标记该细胞所产生的所有reads。这个barcode可以帮助研究人员将每个读取(read)数据分配到其相应的单细胞中去,从而实现单细胞测序。

    此外,10X Genomics还可以通过将barcode信息嵌入到核酸序列中,来实现单细胞RNA序列(scRNA-seq)以及单细胞基因组测序(scDNA-seq)数据的产生。在这种情况下,barcode的含义会稍有不同。 它主要用于区分来自不同细胞的核酸片段。将这些片段重新组合后,可以得到单细胞的RNA或DNA序列信息,从而分析单个细胞的转录组或基因组。

    features主要信息

    在10X Genomics数据中,feature主要存放的是基因或转录本的信息。

    在单细胞RNA测序数据中,feature通常用于指代基因或转录本。每个feature都会被分配一个唯一的ID号,用于区分不同的基因或转录本。这个ID号可以帮助研究人员对基因或转录本进行定量分析和比较。

    在10X Genomics的分析流程中,feature的信息可以通过基因或转录本的参考基因组或转录组进行获取。通过比对实验数据和参考序列,可得出每个细胞中每个基因或转录本的表达情况。这是进行单细胞分析的重要基础。

    同时,10X Genomics还可以根据用户需求来自定义feature信息。用户可以通过提供自己的参考基因组或转录组等方式,来获得更具有自定义性的feature信息,从而实现更加精细化的分析。

    可能的数据类型

    标准的10X genomics的数据

    10X genomics的数据如果是这个样子,那么就可以直接使用Read10X函数直接读取,只需要在这个数据的文件夹即可
    这个是示例文件

    image.png
    scdata <- Read10X(data.dir = "data/GSE96583/stim/")
    

    构建seurat对象即可

    scobj <- CreateSeuratObject(counts = scdata, 
                                project = "pbmc_stim", 
                                min.cells = 3, 
                                min.features = 200)
    ### metadata 增加分组信息
    metadata = scobj@meta.data
    scobj@meta.data$group = "STIM"
    

    已经整理好的数据

    也就是处理好的数据,行是基因名称,列是样本名称,直接读取,并构建seurat对象

    # 根据数据的存放位置读取即可,修改文件的名称
    scdata <- data.table::fread('data/****.txt.gz',data.table = F) 
    
    ### 创建Seurat对象
    scobj <- CreateSeuratObject(counts = scdata, 
                                project = "*****",  # 最终会形成到下图的项目名称中
                                min.cells = 3, 
                                min.features = 200)
    ### metadata 增加分组信息
    metadata = scobj@meta.data
    scobj@meta.data$group = "**** " #根据个人的样本进行命名
    saveRDS(scobj,file = "output/****.rds") #保存为RDS文件,便于读取
    
    image.png

    后续分析,和单细胞分析(一)——seurat包单个样本处理 衔接。

    基因名称和ID存在的数据

    这个时候也是将其处理成上述的数据即可

    scdata <- data %>% 
      select(-Gene_ID) %>% 
      distinct(Symbol, .keep_all = T) %>% 
      column_to_rownames('Symbol')
    

    然后按照上面类似的处理步骤读入,并进行分析即可。

    相关文章

      网友评论

          本文标题:单细胞分析(四)——数据读入

          本文链接:https://www.haomeiwen.com/subject/imntydtx.html