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chapter107 chip-seq的注意事项

chapter107 chip-seq的注意事项

作者: esroom | 来源:发表于2020-03-20 17:47 被阅读0次

    1.怎么判断一个chip-seq峰(peak)?

    实际上并没有一个确切的定义。A “peak” is what a “peak-finder” finds,峰很大程度取决于使用的软件。

    2.RNA-seq和chip-seq数据的比较

    2.1 chip-seq来自的DNA片段比RNA-seq短很多,大多数蛋白的结合峰很窄
    2.2 chip-seq峰的定位范围比RNA-seq宽,RNA-seq都来自于转录组序列
    2.3 chip-seq峰的存在较多的假阳性。RNA-seq测序数据可以清晰地分辨是否来自转录组,而chip-seq数据取决蛋白的结合能力、抗体的结合能力等

    3.chip-seq比对基因组有以下五种结果

    1.没有信号
    2.有信号,但没有峰形,可能是噪音
    3.有峰形,但是低于背景值
    4.有峰形,且高于背景值
    5.有峰形,在样本间存在差异
    

    大部分peak-finder只能发现4,5类信号。

    4.一个chip-seq峰代表什么?

    chip-seq是基于群体细胞的实验结果,因此每一个峰都是群体细胞的总和。
    由于抗体非特异性等原因,存在较多的假阳性峰,所以需要对照试验。

    5.宽峰与窄峰

    取决于蛋白和实验类型,比如chip-nexus峰较窄,不同峰形应用不同的peak-finder。

    6.正负链


    由于可能存在正负链结合位置叠加,因此对于位置要求精确的结果,需要分开进行。

    7.对照组

    7.1 IgG对照:加入IgG进行对照,结合的是非核抗原。
    7.2 input对照:样本不加入抗体进行富集
    详细可见下文

    Nature, 2015: ChIP-Seq: technical considerations for obtaining high-quality data2
    

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