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WGS,WES,RNA-Seq与ChIP-seq测序区别

WGS,WES,RNA-Seq与ChIP-seq测序区别

作者: 找兔子的小萝卜 | 来源:发表于2020-04-28 12:07 被阅读0次

    测序范围的区别:

    全外显子测序测(WEG)

    是所有的能被探针捕获到的外显子区域,在IGV上面能看到reads都是覆盖到外显子及其侧翼区域。

    分析要点

    就是哪些已知的外显子覆盖度不够好,是探针捕获失败还是样本本身变异呢?外显子的哪些区域跟参考基因组序列不一样呢?

    转录组测序测

    是能被转录的区域,不需要是已知的外显子,而且reads是可以跨越外显子比对的!所以分析要点是哪些外显子被连接起来了?每个外显子都被覆盖了吗?

    ChIP-seq

    测的是目标蛋白结合的DNA序列,取决于目标蛋白的结合能力,所以它的分析要点就是这些DNA序列在基因组的位置。

    测序深度的区别:

    全外显子测序的测序

    深度在大部分区域都是均匀的(反应捕获效果,或者拷贝数变异);
    转录组测序一定是不均匀的,一外显子为单位的不均匀(反应表达量差异);

    染色质免疫共沉淀测序

    的测序深度也是不均匀的,以每个碱基为单位的不均匀(反应蛋白结合位点);

    看图解释

    image.png

    只显示了STAT3基因区域的reads覆盖情况。

    ChIP-seq数据

    首先,测序深度都不高,而且测序深度极度的不稳定,深浅不一;其次,整个STAT3基因区域似乎都有覆盖到。

    RNA-seq数据

    可以看到只有exon对应的区域是有reads覆盖的,非常exon和intron的间隔非常明显,因为是PE测序,还可以看到不同的exon被同一个read跨越了intron连接起来了。至于测序深度,STAT3基因的大部分exon都是等深度的,但是STAT3基因与其它基因的测序深度就不一样了,这个图没办法显示那么多。

    WES测序

    可以看到也是主要覆盖exon区域,但是跟intron区别是没那么整齐的分割线了,因为exon是探针捕获富集的,那么会把exon的侧翼区域也部分捕获,测序深度会由exon往intron递减。

    WGS测序

    理论是它应该是全基因组覆盖,而且测序深度非常稳定,但是实际上,测序深度还部分由GC含量,扩增随机性影响。

    作者:oddxix
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    来源:简书
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