测序范围的区别:
全外显子测序测(WEG)
是所有的能被探针捕获到的外显子区域,在IGV上面能看到reads都是覆盖到外显子及其侧翼区域。
分析要点
就是哪些已知的外显子覆盖度不够好,是探针捕获失败还是样本本身变异呢?外显子的哪些区域跟参考基因组序列不一样呢?
转录组测序测
是能被转录的区域,不需要是已知的外显子,而且reads是可以跨越外显子比对的!所以分析要点是哪些外显子被连接起来了?每个外显子都被覆盖了吗?
ChIP-seq
测的是目标蛋白结合的DNA序列,取决于目标蛋白的结合能力,所以它的分析要点就是这些DNA序列在基因组的位置。
测序深度的区别:
全外显子测序的测序
深度在大部分区域都是均匀的(反应捕获效果,或者拷贝数变异);
转录组测序一定是不均匀的,一外显子为单位的不均匀(反应表达量差异);
染色质免疫共沉淀测序
的测序深度也是不均匀的,以每个碱基为单位的不均匀(反应蛋白结合位点);
看图解释
image.png只显示了STAT3基因区域的reads覆盖情况。
ChIP-seq数据
首先,测序深度都不高,而且测序深度极度的不稳定,深浅不一;其次,整个STAT3基因区域似乎都有覆盖到。
RNA-seq数据
可以看到只有exon对应的区域是有reads覆盖的,非常exon和intron的间隔非常明显,因为是PE测序,还可以看到不同的exon被同一个read跨越了intron连接起来了。至于测序深度,STAT3基因的大部分exon都是等深度的,但是STAT3基因与其它基因的测序深度就不一样了,这个图没办法显示那么多。
WES测序
可以看到也是主要覆盖exon区域,但是跟intron区别是没那么整齐的分割线了,因为exon是探针捕获富集的,那么会把exon的侧翼区域也部分捕获,测序深度会由exon往intron递减。
WGS测序
理论是它应该是全基因组覆盖,而且测序深度非常稳定,但是实际上,测序深度还部分由GC含量,扩增随机性影响。
作者:oddxix
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来源:简书
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