LAMP引物设计的要点

1. Tm值

F1C、B1C、LF、LB的Tm值65℃（64-66℃）

F3、F2、B3、B2的Tm值60℃（59-61℃）

2. 引物末端稳定性

F3、F2、LF、LB、B2、B3 引物的 3‘ 末端，F1C和 B1C引物的 5’末端 6个碱基的自由能改变值 δG ≤ -4kcal/mol。

3. GC含量

引物GC含量40-65%，最好50-60%。

4. 二级结构

引物设计的时候要防止形成二级结构，这一点是十分重要的，特别是内引物。

5. 引物间的距离

F2引物5‘端到B2引物5'端距离（扩增的区域）约为120--160bp；

F2引物5‘端到F1引物5’端距离（成环的区域）约为40--60bp；

B2引物5‘端到B1引物5’端距离（成环的区域）约为40--60bp；

F3引物3'端到F2引物5’端距离约为0--60bp；

B3引物3'端到B2引物5‘端距离约为0--60bp。