2018-12-30

 1.CRISPR-Cas9技术原理：

crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通过碱基互补配对与 tracrRNA （trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。而通过人工设计这两种 RNA，可以改造形成具有引导作用的sgRNA （singleguide RNA ），足以引导 Cas9 对 DNA 的定点切割。切割的位点位于crRNA互补序列下游附近的PAM区（前间区序列附近motif），切除基因后激活体内的修复机制，包括同源重组修复和非同源末端连接，或者人为的引入该目的基因的同源序列。切除的目的基因被Cas9降解。

2：嘌呤霉素的作用是筛选稳定转染的细胞系

3：MOI（感染复数）：