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2021-09-20二代测序技术2

2021-09-20二代测序技术2

作者: MaggieXie | 来源:发表于2021-09-21 03:04 被阅读0次

    3.MGI/Complete Genomics测序系统
    该测序技术主要是用到了DNA纳米球测序技术(DNA nanoball sequencing,DNASEQ)
    1)DNB的制备
    把DNA的两端带上接头,变性使得DNA双链解离形成单链,环化引物与ssDNA的两端互补,可以让ssDNA形成环状,再通过连接酶将两端连接, 形成单链环状DNA。
    接着以这个单链环状的DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下进行滚环复制,使得拷贝数达到100-1000,就形成了DNB。大概过程是:在形成第一条子链后,RCA酶到达了引物的起始位置,接着就一边顶开子链,一边合成新的子链。DNB球的目的也是为了形成DNA库,在DNA测序的过程中增强检测信号。实际上,DNB球并不是球状的,而是一条单链的DNA长链。

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    示DNB为单链DNA长链.png
    这样的好处就在于,新链的合成都是基于最原始的模板,不像是其他测序中那样,子链成为模板合成新的子链,具有高保真性。
    2)DNB的加载
    接着将DNB加入到流通池中,加载到规则的阵列芯片中,DNB按照硅片表面的阵列排列,这样能够最大限度地利用位点,并且又不干扰信号。这个过程是通过离子键形成的,DNA在酸性条件下带负电,阵列位点带有正电荷修饰活化位点。除了这个结合位点以外的地方被HDMS修饰,DNB无法吸附。
    3)CPAS技术
    主要是通过不同的探针进行锚定,而不是通过便合成边测序的方法。
    4)MDA multiplex
    在完成一链测序后,DNA聚合酶继续合成反应,因为之前提到的DNB是一个单链的长链DNA,因此在延伸的过程中,DNA聚合酶会遇到下一个引物起始位置。此时,DNA聚合酶边解旋复制,形成MDA。此时反向引物与反向链结合,进行反向链的测序。一般来说,反向链的数量比正向链多很多。
    目前的测序平台主要包括了BGISEQ,MGISEQ以及DNASEQ等。其中DNBSEQ是目前测序通量最大的平台之一。
    更多信息详见【陈巍翻译】华大DNB二代测序技术_哔哩哔哩_bilibili

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