Loading buffer 的配比和配置方法

Loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液

 

对于琼脂糖凝胶：

6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的蓝色的条带是溴酚蓝，代表的片段大小是 300bp，后面的有点绿色的条带是二甲苯青，代表的片段大小在4000bp左右。

功能主要有两个：

第一， 里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；

第二， 第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。

6×loading buffer 一般配置：　　

30mM EDTA

36%(v/v) Glycerol （甘油）

0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF （二甲苯青FF)

0.05%(w/v) Bromophenol BLUE (溴酚蓝)

对于SDS-PAGE：

5×SDS-PAGE Loading Buffer组份浓度：　　

250mM Tris-HCl（pH6.8）

10％（W/V） SDS

0.5％（W/V） BPB

50％（V/V）甘油

5％（W/V）β-巯基乙醇

配制量： 5mL

配制方法：　

1.    量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。

1M Tris-HCl 1.25mL

SDS0.5g

BPB25mg

甘油 2.5mL

2.加入去离子水溶解后定容至5mL。

3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。

5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右