首先借助SDS-PAGE凝胶，将总蛋白按照不同分子量大小进行分离，然后将胶上的蛋白质转移到膜上，再利用相应的靶标抗体进行检测的方法。
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制胶（PAGE凝胶快速制备试剂盒）
a. 取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，各2.7mL，混匀；
b. 向上述步骤a的混合溶液中加入60μL的改良型促凝剂，混匀；
c. 将步骤b的混合溶液注入制胶玻璃板中，
d. 待下层胶凝固后（约15min），倒去上层苯乙醇；
e. 取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，各0.75mL，混匀；
f. 将步骤e的混合溶液中加入15μL的改良型促凝剂，混匀；
g. 步骤f的混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳子；
h. 待上层胶凝固后，拔去梳子即可用于电泳。
分离胶（下层胶）80v，30min
浓缩胶（上层胶）120v，1h
制胶配方.png
蛋白电泳
a、组装SDS-PAGE
b、蛋白上样
c、接通电源、开始电泳
上样与电泳.png
跑电泳.jpg
转膜
封闭、孵一抗二抗
显影
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本文标题：实验复盘-Western Blot
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