组织中为何形成冰晶?
冰晶形成的原因是组织冷冻速度太慢。冰冻开始时,冰晶成核率较慢,以后逐渐增加,其临界温度为-33℃,从-30℃降至-43℃之间,成核率急剧增加,然后再减慢。冰晶的大小与其生长速率成正比,而与成核率(形成速率)成反比,即冰晶形成的数量愈多则愈小,对组织结构影响愈严重。因此,应尽量降低冰晶的数量。要减少冰晶形成,组织冷冻的方式和操作流程至关重要。实操技巧︱如何在免疫组化冰切中减少冰晶的形成? - 知乎 (zhihu.com)
未经固定的组织切片时冰晶较多,这是公认的事实,即使固定后的组织切片仍然会有一定的冰晶,为防止冰晶的形成,常可采取如下方法:1.速冻法:将组织置入低温环境,使组织骤然降温【1】。2.利用高渗溶液吸收组织分子:将组织置于20% ——30%的蔗糖溶液中,置4摄氏度冰箱足够时间,观察组织快,待其沉底后,取出切片。这样即可大大减少冰晶的形成。【1】蔡文琴实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术[M]
如何理解组织脱水过度的概念?
答:现在的技术人员越来越清楚地认识到,组织脱水过度并不是正真的过度。因为有人用反复实验表明,脱水时间长的组织反而利于切片,如尸检标本。所以说,这里的过度其实不是因组织真的脱水过度而过度,而是可能因为组织要么固定不佳,要么脱水不足,导致组织内部含有一定水分,在遇到二甲苯透明,石蜡浸透时,在温度的作用下引起的硬化而已。http://www.taiva.com.cn/index.php?c=show&id=125
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