2019年2月16日，星期六，小雨
昨天的WB结果太糟糕了，让我难受了好久，回家之后简单吃点晚饭，也不想再干活了。
反复思考为什么我的目的条带看不了了，尽管追问做人，但仍不得其果，甚是难过。
可能是太疲惫了吧，也可能是天气缘故，还有可能是周末没有闹钟，今天一下子睡到了九点左右（睡到自然醒，是多么幸福的）。
由于受昨天WB失力的影响，今天对做实验的热情，明显有所下降！不过值得庆幸的是，我还是坚持去了。
到了实验室，先是把今天准备完成的2波免疫组化片子放入烤箱（昨天已经把烤箱打开了，节省了2小时）。接着把昨天遗留的免疫组化和WB各一波继续完成。
今天破了一个记录——同时做两波免疫组化（47张片，期间有一片被我摔坏了，剩46张。到最后透明的时候，有破了一张，不过这张还可以用，我补救回来了）。还有一个不知道算不算——今天完成了三波免疫组化。三波是怎么算的呢？昨天的免疫组化做到一抗孵育过夜，今天完成后续步骤＋今天的完整两波＋今天的免疫组化做到一抗孵育过夜。
说起今天的WB曝光，我迟迟不敢去，深怕还是昨天的那种结果。后来鼓起勇气，得到了阳性结果，太开心了！
补充一下：
昨天WB结果太糟糕了，没有心情打文字，今天补充说明一下。
（1）组织WB的内参有显影，而目的蛋白全未显影。（2）后来改超敏的ECL曝光液，细胞的内参有显影，M3有部分显影，而M14仍是白片。
虚心向别人请教了原因：
1、一抗、二抗是不是搞混了？
2、胶切错了，使得目的条带遗漏？
3、组织蛋白表达量太少了？
4、因为目的蛋白是催化酶，会不会提蛋白时没使用相关蛋白酶抑制剂（如cokertail等），导致蛋白丢失？
5、蛋白（两周前提的）放置时间太久了以致于蛋白降解了？
6、转膜时间（300mA，2h）太长了，导致蛋白穿过膜？
7、电泳液时间太久了（我太懒了，用了别人的电泳液——十天前，跑过一次）？
8、曝光时间太短了？
…
WB真的是坑爹货，让人又爱又恨（没办法啊，绕不来的实验步骤啊）！
预知详解，请听下回分解！
网友评论