答:操作程序中主要包括:电极类型、电压(V)、脉宽(μs)、电击次数、间隔时间(ms)。
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中科院基因组所,使用壹达X-Porator H1,转染mRNA入人源DC细胞。设置参数为电压230V,脉宽100µs,重复6次,间隔1s,TE=85.5%,V=81.2%,M=69.4%。使用市场L电转仪产品进行相同的实验,TE=97.2%,V=47.1%,M=45.8%。
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NK细胞电转EGFP mRNA,电转后Day2细胞活率98.6%,转染效率93.8%;
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“通过激活T细胞电转EGFP IVT mRNA实际测试,从壹达X-Porator H1放大到X-Porator M1,GFP表达阳性率从95.3%到放大后的93.9%****,活率与增殖倍数维持高水平,达到平稳放大效果”
推荐使用范围及适用细胞:
▶ 推荐电压:100V-350V;
▶ 细胞适用范围广,细胞种类较多,如一些常见肿瘤细胞系及正常细胞细胞系,SW480、K562、Marc145、293T等。
▶电转液:EBEL Transfection Buffer
如何设定电转体系?怎样选定最适电转参数?
答:电转体系主要根据不同细胞类型以及使用的电极类型进行设定:96孔板电极针常用电转体系为1×106 cell/(3-5)μg plasmid/100μl buffer。
电转参数的设定主要与细胞的类型、选择的电转缓冲液以及选择的质粒有关。对于常见细胞的电转,参考细胞档案库。
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