qRT-PCR设计引物

作者: 墨白的生信学习笔记 | 来源:发表于2023-02-19 20:11 被阅读0次

2022.11.13荧光定量引物设计教程:

1.将自己的目的基因(cDNA)序列粘贴至https://www.genscript.com/tools/real-time-pcr-taqman-primer-design-tool

选取最大的一条(出现非特异性扩增的概率低,序列长度长匹配到的基因更稳)将上游引物及下游引物放入NCBI——Blast

目的:是否为非特异性扩增,尤其是基因家族基因相似度高,出现非特异性扩增的可能性更大,所以放入NCBI——相当于提前做一次电子PCR帮助我们筛选

点击get primer

反应体系:2x Green real time PCR Mastermix 5微升、F和R各0.5微升、cDNA模板:3微升、ddH2O1微升

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