一、今天很充实,主要是自己又熟练和规范了一些实验操作。
1、搞明白了自己之前旧毕设——转基因拟南芥的阳性鉴定。
背景:铜离子转运蛋白copt1~6是一个基因家族,推测其可能存在功能冗余和协同作用。(详细见Yuan Meng的文章)
工作:提取转基因拟南芥的基因组→PCR→电泳→阳性鉴定。
2、摇菌
菌落pcr中用保鲜膜保存的模板,全部加到10mL管(先加4mL加了Kna的LA培养基)中,37℃摇10h。
3、保存菌液
2mL管(橙黄色盖子,西门柜子里有),10%甘油保存,即0.4mL50%甘油(悦姐4℃)+1.6mL菌液;命名格式为“菌落名—载体名—基因名—日期”。
4、测序
擎科生物|华大基因。以擎科为例,填表(注意填写是否返回样品!),表和样品放袋子,再放冰箱(靠超净工作台)的袋子。
5、电转(冰上操作,迅速)
30微升农杆菌感受态+0.4微升质粒(搅)
→取30微升至电转杯槽
→调4111至1800V红色按钮按下,电转发声
→+600微升无抗LA(吸打混匀) → 28℃振荡培养2h
→涂板(kana250微升1%,利福平1250微升5%,LA培养基) → 28℃倒置培养
6、热激(冰上操作)
感受态细胞不同于电转。感受态细胞在-76℃冰箱:电转农杆菌EHA105(28℃)是大圆盒白盖,热激大肠杆菌DH5a(37℃)是瘦小盒子红盖,每离心管是100微升。
热激做的是连接产物K3ein3和K7ein7。涂板的板用的是加了Kna的LA板。
https://www.jianshu.com/p/fe75207b99f2热激步骤
二、今天很饱,主要是中午跟露姐去校门口蒙阴光棍鸡要了半只鸡,得有三斤沉,整一大盘,吃撑得我晚上没食欲了。
三、今天也是高兴的一天,因为我又收到了简书官方送的礼物——另外的一本书。
菜鸟取的小快递 赠书封面正面 赠书封面反面
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