WB灰度值分析

WB是研究蛋白表达的一个经典方法。对于一些时间点或者是不同组织蛋白表达量的分析就涉及到量的变化。一个比较简单的综合性质图像处理软件Image J可以很方便的进行灰度分析。

对于一些时间点或者是不同组织蛋白表达量的分析就涉及到量的变化。通过观察处理前后条带的深浅判断该处理对基因的表达造成的影响，这种判断是存在误差的，这时候就需要对结果条带的灰度值进行计算并做统计分析——目的蛋白的灰度值除以内参的灰度值，以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量，这样得到的结果才更加准确、更有说服力。

 image J灰度分析步骤

· 打开Image J软件，导入WB条带图片：File→Open→找到WB条带。

· 把图片转化成灰度图片，一般灰度分析的要求图片8bit就好：Image→Type→8-bit。

· 消除背景影响：Process>Subtract Background. 选择50基本可以。

· 设置定量参数：Analyze>Set Measurements, 点击面积area，平均密度mean gray value，和灰度值Integrated Density

· 设置定量单位 Analyze>Set Scale,在“Unit of length” 边的方框里输入 "pixels"（像素） 

· 第一个矩形工具→选上所有条带→analyze→Gels→select first lane

 · 分析圈中条带analyze→Gels→plot lanes出现山峰样图。

 · 选中直线工具，将开口波峰关闭。 

· 选中魔棒工具，点击波峰，就得出所有area值。

· 当测定完所有条带，选结果中的“Edit”的“Select All”，然后复制数据“IntDen”到Excel表即可进行分析。也可以直接在Results对话框中，选择File → Saveas，直接导出excel表格。在excel表格中将目的蛋白的灰度值除以内参蛋白的灰度值，进行归一化处理。