噬菌体是一类感染细菌的病原体,依据其遗传物质特征可以分为dsDNA噬菌体,ssDNA噬菌体和RNA噬菌体。而基于噬菌体的ssDNA合成技术正是利用ssDNA噬菌体的基因组合成过程进行ssDNA的合成。其中最为常用的ssDNA 噬菌体是M13单链噬菌体。
M13噬菌体产生单双链DNA的机制:以(+)链DNA为摸板,合成互补(-)链,该双链称复制型DNA(RFDNA)。RFDNA在宿主细胞内能快速增殖,可增加到每个细胞约200个拷贝。单链特异的DNA结合蛋白结合在(+)链上,从而阻断了其互补链,即(-)链的合成,这样,细胞就会不断的合成(+)链DNA 。游离出来的(+)链DNA先与基因V的编码产物形成特异的DNA-蛋白质复合物,然后转移到寄主细胞膜,同时基因V的蛋白质从(+)DNA链上脱落下来,余下的M13(+)链DNA则是从其感染的寄主细胞的细胞膜溢出的过程中,被外壳蛋白包装成病毒颗粒的。
噬菌体扩增合成ssDNA
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