利用CTAB法提取褐飞虱DNA

    为了搞清楚实验操作的原理以及试剂的作用，整理了很多资料，对很多实验步骤的细节进行了补充，可能有误，内容仅供参考，欢迎指正。

CTAB提取DNA缓冲液配方：2%CTAB，1.4M NaCl，100mM Tris-HCl（pH 8.0），20 mMEDTA。具体配置步骤：

（1）1 M Tris-HCl（pH 8.0）：在160 mL ddH2O中溶解24.2 g Tris，用浓HCl调节pH至pH 8.0，加ddH2O定容至200 mL；

（2）0.5 M EDTA（pH 8.0）：在80 mL ddH2O中加入16.81 g Na2EDTA（二水乙二胺四乙酸二钠），搅拌溶解，用NaOH固体颗粒调pH至8.0，定容至100 mL；

（3）CTAB提取DNA缓冲液（200 mL）：CTAB4 g，NaC116.364 g，1 M Tris-HCl 20 mL（pH 8.0），0.5 M EDTA 8 mL（pH 8.0），再用ddH2O定容至200 mL，高压灭菌备用。

提取褐飞虱基因组DNA（单头试剂用量减半），具体方法如下：

（1）根据需要配制适量的氯仿-异戊醇混合液（24：1），水浴锅65℃预热，取适量异丙醇于-20℃预冷；

（2）CTAB缓冲液65℃预热后加入0.5-1.0% β-巯基乙醇；

（3）向装有单头褐飞虱的2 mL研磨管中加入两粒灭菌的直径3 mm钢珠，再加入800 μL 65℃预热过的CTAB缓冲液（含β-巯基乙醇），用全自动样本研磨仪60 Hz研磨2次，每次1 min；

（4）放入65℃水浴锅水浴15 min，期间摇动1次使CTAB与样本充分混合；

（5）取出研磨管常温冷却2 min，加入800 μL氯仿-异戊醇混合液（24:1），缓慢摇晃1-2 min使溶液混匀；

（6）12,000 r/min离心5-10 min，小心吸取上清至新的1.5 mL离心管中，再次加入700 μL氯仿-异戊醇混合液，缓慢摇晃1-2 min；

（7）12,000 r/min离心5-10 min，小心吸取上清至新的1.5 mL离心管中；

（8）迅速中加入等体积的-20℃预冷过的异丙醇，混匀，-20℃放置2 h（单头需过夜）；

（9）12,000 r/min离心5-10 min，弃去液体，留下离心管底部的DNA沉淀；

（10）加入1 mL 70%乙醇洗涤DNA沉淀，洗涤2次；

（11）吸去多余乙醇，将含有DNA沉淀的离心管开盖置于超净工作台风干；

（12）风干后用10-20 μL ddH2O溶解DNA沉淀，保存至-20℃待用。