腹膜转移癌（PC）是癌细胞经血路腹膜转移或腹膜直接种植生长所致。多继发于腹腔内肝、胃、结肠、胰腺和卵巢、子宫的癌肿和腹膜后的恶性肿瘤，也可继发于肺、脑、骨骼、鼻咽部的肿瘤以及皮肤黑色素瘤等。患者病情发展快、预后性差。近年来发展的利用基因改造技术表达肿瘤特异性嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）的T细胞显示出的靶向性、杀伤活性和持久性，或许将为腹膜转移癌的治疗注入了新方案。
CAR-T治疗中的细胞基因改造环节，主要有依靠病毒的转导和非病毒载体的转染两种技术路线。值得关注的是，由于病毒载体生产的工艺复杂性和低效率，以及由于病毒载体具有潜在的致病性，所以要求更严格的质量控制和安全性检测，这些因素都导致病毒转导的环节的成本较高，在CAR-T生产的总成本中占重要比重。提高病毒载体的生产效率和规模会有助于解决这一成本瓶颈，而现今也有用户在尝试另一种解决方案——即，采用非病毒载体的基因转染技术。研究者认为，非病毒的转染技术可以大大简化了病毒载体相关的供应链限制和成本负担，相关的技术有转座子/转座子酶系统（Transposon/transposase system）、基因编辑（NEPA21 ）技术如 ZFN, TALENs, and CRISPR/Cas9 等。使用电转染（NEPA21 electroporation）有助于提高此类非病毒载体的转染效率，从而降低基因改造环节的复杂性和成本，是非常值得尝试的事情。
2017年1月10日在OncoTarget发表一篇文章，“Intraperitoneal immunotherapy with T cells stably and transiently expressing anti-EpCAM CAR in xenograft models of peritoneal carcinomatosis”，描述了一种治疗终末期PC的嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法，为肿瘤的临床实验提供新视角。
研究者利用4D5MOC-B单链可变片段构建了EpCAM特异性的第三代CAR。文章中，作者尝试了基于mRNA电穿孔的技术，获得 抗EpCAM CAR-T细胞。研究发现，“将mRNA导入具有抗EpCAM CAR瞬时表达的T细胞中可延迟荷瘤小鼠的疾病进展。通过腹膜移植于小鼠（16天前接种的肿瘤细胞）中也观察到了良好的治疗效果。这一发现提示了通过定期重复注射转染了EpCAM靶向CAR的mRNA的T细胞来减少癌症患者疾病是一种有趣的治疗方法，该方法很有吸引力。” 作者认为，这项疗法可能被用于治疗晚期PC，但目前实验只是在小鼠身上取得了初步成功，该项技术是否安全、有效，值得临床前和临床进一步评价。
本实验中研究者们使用了NEPA21 电转系统途径：
文中表明，“经GFP mRNA优化后，用mRNA电穿孔的人T细胞转染效率为97%（图A）。用MgFP RNA载体对T细胞进行电穿孔，转染效率为79%（图A）。然后用流式细胞仪分析，用Fc特异性抗体检测编码抗EpCAM CAR的mRNA在人T细胞中的表达，表达量高达68.5%（图 B）。
(A) The electroporation efficiency in T cells. The cells were transfected with normal GFP mRNA for cytoplasm expression and mGFPmRNA CFP expression was examined by flow cytometry.
(B) Flow cytometric analysis to examine anti- EpCAM CAR expression on T cells after electroporation. The cells were collected 24 hours after electroporation for analysis.
NEPA21摘录文献
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