一、峰拖尾的问题
1、筛板阻塞
解决办法：a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷
解决办法：填充色谱柱
3、干扰峰
解决办法： a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误
解决办法：调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应
解决办法：a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱
二、峰前延可能的原因
* 在大峰前，有小峰流出；
* 柱死体积；
* 样品溶剂不适当；
* 过滤片部分堵塞；
* 柱过载；
* 色谱柱损坏；
1、柱温低
解决办法：升高柱温
2、样品溶剂选择不恰当
解决办法：使用流动相作为样品溶剂
3、样品过载
解决办法：降低样品含量
三、峰分叉
1、保护柱或分析柱污染(柱中有死体积)
解决办法：取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在， 可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相
解决办法：改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。
四、峰变形
1、样品过载
解决办法：减少样品载量
五、早出的峰变形
1、样品溶剂选择不恰当
解决办法： a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂
六、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
1、柱外效应
解决办法：a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池
七、酸性或碱性化合物的峰拖尾
1、缓冲不合适
a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
2、额外的峰
3、样品中有其他组份
4、前一次进样的洗脱峰
解决办法： a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速
5、空位或鬼峰
解决办法：a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积
八、保留时间波动
1、温控不当
解决办法：a、调好柱温
2、流动相组分变化
解决办法：a、防止变化（蒸发、反应等）
3、色谱柱没有平衡
解决办法：a、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
九、保留时间不断变化
1、流速变化
解决办法：a、重新设定流速
2、泵中有气泡
解决办法：a、从泵中除去气泡
3、流动相选择不恰当
解决办法：a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相
十、基线漂移
1、柱温波动（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）
解决办法：控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器
2、流动相不均匀（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）
解决办法：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体
解决办法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）
4、检测器出口阻塞（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）
解决办法：取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化
解决办法：更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时
解决办法：用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
解决办法：检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂
8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
解决办法：使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
解决办法：重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
解决办法：将波长调整至最大吸收波长处
十一、基线噪音（规则的）
1、在流动相、检测器或泵中有空气
解决办法：流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2、漏液
解决办法：见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。
3、流动相混合不完全
解决办法：用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）
解决办法：减少差异或加上热交换器
5、在同一条线上有其他电子设备
解决办法：断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。
6、泵振动
解决办法：在系统中加入脉冲阻尼器
十二、柱压高
1.新柱压力高
以原厂报告上完全一样的条件下测试比较，若压力在报告压力值上下浮动200-300psi以内，可视为正常范围；若高于出厂报告压力值1倍或以上，有以下原因引起：
99.9％原因：系统压力高，包括保护柱，泵，管路和接头等引起。
解决方案：从系统上拿掉柱子，逐步检查具体哪个部件引起的；或者换不同的仪器平衡柱子，比较压力值，排除柱子本身的问题。注意：必须是平衡柱子达足够时间后的稳定压力值。如果您仍然不放心，可先寄回在我们公司实验室测试。
0.1％原因：柱子本身压力高，寄回供应方测试，如若核实，可提供相关更换等处理。
2.使用一段时间后的旧柱压力升高
HPLC系统原因仍然存在，排除系统原因后，几乎100％的原因是由于实验过程中杂质在柱中的累积。
解决方案：尽量完善操作条件，做完样品后要及时冲洗干净，如缓冲盐的流动相一定要用高比例的水溶液（如90％）冲洗完全后再用有机相保存。
十三、柱效低
1.新柱柱效低
以原厂报告的条件下测试同样的标样，Supelco，Kromasil以及Agilent等柱子以甲苯作为比较，CNW柱子以萘作为比较，Waters柱子以苊作为比较，根据仪器不同，如果250*4.6mm，5um柱效在2000左右的差异可以认为是符合出厂要求的；如果您的仪器测试结果相差太大，有以下原因：
99.9％原因：系统问题，包括接了保护柱，平衡时间不够等引起。
解决方案：取下保护柱（测试柱效时不能加保护柱），增加平衡时间，对于新柱，50mm长的柱子平衡时间在30min以上，150mm的柱子在45min以上，250mm长的柱子在75min以上。如果您不放心，可先寄回在我们公司实验室测试。
0.1％原因：柱子本身柱效低，寄回公司检测，如果核实，可提供相关更换处理。
2.使用一段时间后的旧柱柱效降低
排除系统原因，基本是测试的条件和样品导致，如测试条件的pH值在柱子耐受pH值范围以外，导致柱子内填料的溶解或键和相流失，此外，样品前处理不好也会使柱子很快损坏。
十四、峰前沿、拖尾等峰形不好
（1）柱效测试标样峰形差：基本原因都是平衡时间不够引起，建议您平衡时间需达到第一部分我们推荐的时间。此外，还有系统原因，可建议您换一台再测试或寄回测试。
（2）样品峰形差：如果柱效测试峰形很好，但是测试样品峰形差，排除平衡时间等问题后，基本是由于样品性质所引起，如一些碱性样品会有拖尾现象，但是降低流动相pH值会有改善。
十五、寿命短
根据不同系列的柱子或不同的测试条件，寿命长短各有不同。建议您选择性能稳定、质量有保证的品牌。
1.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？
①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子
③可能柱超载，减少进样量。
2.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法是什么？
①样品量不足，解决办法为增加样品量
②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
④检测器衰减太多。调整衰减即可。
⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
⑦检测池中有气泡。解决办法为排气。
⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
⑨流动相流量不合适。调整流速即可。
⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
3.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？
①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；
②比例阀失效，更换比例阀即可；
③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；
④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；
⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；
⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
4.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：
①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；
②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；
③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。
④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。
5.色谱柱中的流动相会排干吗？
不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。
相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如，经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
6.为何出现峰展宽？
①样品体积过大——用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
②在进样阀中造成峰扩展——进样前后排出气泡以降低扩散
③数据系统采样速率太慢——设定速率应是每峰大于10点
④检测器时间常数过大——设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%
⑤流动相粘度过高——增加柱温,采用低粘度流动相
⑥检测池体积过大——用小体积池,卸下热交换器
⑦保留时间过长——等度洗脱时增加强溶剂含量,也可用梯度洗脱
⑧柱外体积过大——将连接管径和连接管长度降至最小
⑨样品过载——进小浓度小体积样品
7.除了在线脱气，常用的实验室脱气方式还有哪些？
加热回流脱气，脱气效果最佳，但无法保持；氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多；真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失；超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中最常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好。
8.如何简单判断比例阀是否内漏？
设定泵使用一个单独通路（A），打开Purge阀，流速5mL/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，观察这些通路（B、C、D）内的溶剂是否随着流动，正常时均不应流动。
（文章来源：高效液相色谱）
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