你看科研和医学实验,一个酶联免疫法检测某一项指标时,说来容易,做起来却不是那么回事。使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
首先那个酶标包、酶标仪器进口时就很贵。
我们国产的试管是很好的,洗刷时贴壁的玻璃显示水珠不挂壁、洗涤后不附着残留、这就是好东西。
可是你在动用移液枪时老发现枪头老残留标准液时心慌不慌、计量滴定还能那么准确吗?所以一把移液枪我们用的8000元的一把枪,很贵(进口),计量准确,把残留准确预留出来。
(我们国产)海尔冰箱让它维持零下80℃就能办到,我们的离心机、恒温仪都能做到便宜好用,非常迎合科研团队的需求。
再论封闭液、目前比较通用的是5%的脱脂奶粉和1 %的BSA,可以是牛血清白蛋白液,上述对于几乎所有的抗原都有封闭的作用,如果你对检测的要求比较高,最好选用后者,因为前者有时会有颗粒性的杂质,其次是配制上述溶液的时候可以用PBST也可以用普通的PBS,没有太大影响。出现杂质、洗涤不干净,洗涤液配置不干净,都是科研之忌讳。就论这两类封闭液,这两种对于几乎所有的抗原都可以有封闭的作用,如果你对检测的要求比较高,最好选用后者,因为前者有时会有颗粒性的杂质,其次是配制上述溶液的时候可以用PBST也可以用普通的PBS,没有太大影响。
介绍介绍酶联免疫法。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:
①固相的抗原或抗体
②酶标记的抗原或抗体
③酶作用的底物(显色剂)。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。
网友评论