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CAR-T细胞治疗中转染hCR-2基因的技巧

CAR-T细胞治疗中转染hCR-2基因的技巧

作者: 小科研 | 来源:发表于2022-09-05 17:07 被阅读0次

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)指的是嵌合抗原受体T细胞通过识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3-δ链或FcεRIγ的胞内部分在体外偶联为一个嵌合蛋白,通过基因转导的方法转染患者的T细胞,使其表达嵌合抗原受体,使得患者的T细胞被“重编码”后,能够生成大量肿瘤特异性的CAR-T细胞。把重新编码后的嵌合抗原受体T细胞加进患者身体里,这种嵌合抗原受体就像GPS一样可以特异性地追踪和识别并引导T细胞杀伤肿瘤细胞。以CAR为基础的细胞免疫治疗是一种新的治疗恶性肿瘤的模式,为部分实体瘤患者带来了治愈的希望。

2017年日本福冈大学医学院学者Hirotomo Shibaguchi,Naixiang Luo,Naoto Shirasu等发表OncoTargets and Therapy文章Enhancement of antitumor activity by using a fully human gene encoding a single-chain fragmented antibody specific for carcinoembryonic antigen,进行电转实验。

文中研究表明,为了增强免疫细胞在肿瘤微环境下的抗肿瘤活性,研究者使用表达CAR的淋巴细胞结合IL-2融合蛋白,该融合蛋白含有针对癌胚抗原的单链片段抗体(scFv)。通过一系列对CAR进行改造,使其最有效地激活并表达INF-γ(肿瘤坏死因子)。实验结果显示,CAR导向的外周血单个核细胞(PBMCs)与含IL-2形成的融合蛋白的联合治疗应用,对MKN-45的抗肿瘤活性效果显著增强。

这种新型的CAR 与由功能性细胞因子和全人类单链抗体组成的融合蛋白的联合治疗将可能是一种很有前途的癌症免疫治疗方法。

文中表明,“使用原代细胞核酸转染仪(Lonza Group Ltd, Basel, Switzerland)转染T细胞,转染效率达到40%,但遗憾的是,在其实验中,培养24小时后的细胞存活率为低于50%。由于我们使用原代细胞来评估单链抗体在CAR和融合蛋白中的联合抗癌作用,因此在基因转染后提高细胞存活率非常重要。”

“我们比较了2种电穿孔系统的转染效率和细胞存活率:NEPA在人T细胞中转染效率较高。因此,研究人员将其运用到转染hCR-2基因到PBMCs。(表S 1)”

“通过流式细胞仪检测EGFP的表达,在电穿孔后24小时,NEPA转染后PBMCs中hCR-2的表达率约为60%,细胞存活率高达95%。”,此次的数据呈现良好的趋势。

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