蛋白质谱鉴定

MALDI-TOF/TOF原理：

基质辅助激光解析（MALDI）技术是将样品均匀包埋在基质中，基质吸收激光提供的能量而蒸发，携带部分样品分子进入气相，并将一部分能量传递给样品分子使其离子化。

·    离子通常带1-2个电荷，对分子质量较大的样品而言，不会形成复杂的多电荷图，因此对图谱的解析比较清楚；

·    对杂质的忍耐性较好；

LC-ESI-MSMS原理：

电喷雾（ESI）技术是将待测分子溶解在溶剂中，以液相方式通过毛细管达到喷雾口，在喷雾口高压电场作用下形成带电荷的微滴，随着微滴中的挥发性溶剂蒸发，微滴表面的电荷体密度随半径减少而增加，达到某一临界点时，样品以离子化的方式从液滴表面蒸发，进入质量分析器。

·    电喷雾离子化方式容易形成多电荷离子，因此在较小的M/Z范围内可检测到大分子质量的分子；

·    采用液相方式进样，一般与液相色谱（LC）连用，根据样品在色谱中不同的保留时间对其先进行分离后鉴定，大大提高了分析的效率和精确度。

样品要求：

1.    防止角蛋白污染

2.    样品状态：液体、固体或胶内蛋白质（接受考马斯亮兰染色和银染样品鉴定）

3、含盐量： 挥发性无机盐< 20 mM; 不挥发性无机盐< 5mM

4、不少于200 ug /一块胶（银染）；

5、胶内蛋白质鉴定，蛋白质样品量不少于1mg/一块胶（考马斯亮兰染色）

蛋白质鉴定结果常见问题：

1、由于角蛋白等蛋白质的污染，造成鉴定为污染蛋白。

2、由于蛋白量过少引起鉴定结果的评分低，可信度不高。

3、由于蛋白质纯度不足，造成鉴定结果为混合蛋白质。

4、由于蛋白质为未知蛋白，造成鉴定无结果。

注意事项：

1、推荐采用考马斯亮兰染色。因为该方法的成功率较高，而银染的成功率则会低很多。

2、银染的方法为快速银染法。常规银染法不适用质谱鉴定。

3、考马斯亮蓝染色样品的上样量>1mg

4、银染法得上样量>0.6mg