T4 PNK (T4 Polynucleotide Kinase)T4多聚核苷酸激酶的功能
激酶:利用ATP,给底物加磷酸,是磷酸化酶
磷酸酶:将底物去磷酸化,是去磷酸化酶
总结:
1:5’激酶作用(有ATP或则其它NTP前提条件下加磷酸)和磷酸酯酶作用
作用对象:在单链,双链DNA,RNA,寡核苷酸,带有3’磷酸基团的单核苷酸
作用方式:5'-OH + NTP → 5'-P + NDP,
反应可逆,在有NDP,缺失NTP时5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最适pH为6.4左右),当两者都有时5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP
此外,补充3'-P + NTP →3'-P -P+ NDP
2: 3’磷酸酯酶作用(最适ph5.9左右,注意购买T4 PNK产品时查看是否经过修饰,即去除3’磷酸酶活性)
RNA 3'-P →3'-OH + Pi
DNA 3'-P → 3'-OH + Pi 或者3'-P-P →3'-OH + 2Pi
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