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末端修饰那点事

末端修饰那点事

作者: 本木大 | 来源:发表于2019-08-23 09:58 被阅读0次

T4 PNK (T4 Polynucleotide Kinase)T4多聚核苷酸激酶的功能

激酶:利用ATP,给底物加磷酸,是磷酸化酶

磷酸酶:将底物去磷酸化,是去磷酸化酶

总结:

1:5’激酶作用(有ATP或则其它NTP前提条件下加磷酸)和磷酸酯酶作用

作用对象:在单链,双链DNA,RNA,寡核苷酸,带有3’磷酸基团的单核苷酸

作用方式:5'-OH + NTP → 5'-P + NDP,

反应可逆,在有NDP,缺失NTP时5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最适pH为6.4左右),当两者都有时5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP

此外,补充3'-P + NTP →3'-P -P+ NDP

2: 3’磷酸酯酶作用(最适ph5.9左右,注意购买T4 PNK产品时查看是否经过修饰,即去除3’磷酸酶活性)

RNA 3'-P →3'-OH + Pi

DNA 3'-P → 3'-OH + Pi 或者3'-P-P →3'-OH + 2Pi

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