二步法免疫组化操作流程及细节分析

Elivision二步法免疫组化染色步骤
1 石蜡印片脱蜡和水化后，用PBS(pH7.4)冲洗二次，每次3分钟(3x3min)
2 根据每种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。(具体选择见附录)
3 如果有必要，每张切片加1滴或50ul的3％H202，室温孵育10分钟，以阻断内原性 过氧化物酶的活性。PBS冲洗3x3·．
4 除去PBS液，每张印片加1滴或50ul第一抗体(用户自选)，室温孵育60分钟或4'C 过夜，建议参见每种抗体的说明书。
5 PBS冲洗3x5’。除去PB5液，每张印片加1滴或50ul聚合物增强刑(试剂 A )，室腽孵育20分钟．PBS冲洗3x3．
6 除去PBS液，每张切片加1滴或50ul酶标抗鼠／免聚什物(试剂 B )，室温孵育30分钟。PBS冲洗3x3·．
7 除上PBS液，每张切片加1滴或5Oul新鲜配制的DAB或AEC溶液(具体选择见附录)，显微镜观察3~5分钟( DAB )或10分钟( AEC )。
8 自来水冲洗，苏木素复染，若有必要，可用0.1％HCl分化自来水冲洗，PBS返蓝．
9 如果用DAB显色，则切片经梯度酒精脱水干燥，(二甲苯透明)，中性树胶封片，如果用AEC显色，则切片不能酒精脱水， 而直接用水性封片剂。

附：1.免疫组化实验中的抗原修复
2.免疫组化技术常用显色液的选择与使用