本文选自Nature communication， https://doi.org/10.1038/s41467-019-14060-x，喜欢的朋友可以自行下载。
不废话，上图。
咋一看挺复杂啊。CD73可以产生EADO,细胞外ADO通过腺嘌呤能A2A受体4-6施加免疫抑制作用。CD73在CAF高表达，且CD73与多种肿瘤预后相关，因此，作者就作了CAF与肿瘤免疫相关的内容。
然后作者作了一波生信分析，相当于对肿瘤组织进行基质/免疫评分那样的类型，然后PCA分析，证实CD73的表达与CAF丰度呈正相关。同样，针对免疫反应基因集的聚类将NT5E高和NT5E分别定位到免疫反应低簇和高簇中，支持负相关(图1g和补充图1g)。重要的是，在这557名患者中，NT5E水平高与不良的临床结果密切相关。
能看懂的解释解释啊
作者为了确定不同肿瘤亚型之间CD73表达能力，证实，CD73确实是CAF高表达的表现。但是在MC38肿瘤表达的水平和CAF相当，但是EG7这个细胞CD73-,并且CAF高度富集，那么，作者就盘她。
IF证实CD73hi信号分布于EG7TME，大部分与ER-TR7+CAF重叠(图2C)。计算机辅助图像分析显示EG7-CAFs占据了高达30%的面积(图2B，d)，尽管只占流式细胞仪测定的细胞密度的2-3%(FACS，图2A，b)。相反，CD11b+髓样T细胞和CD3+T细胞虽然分别占细胞密度的30%和5%，但仅占面积的10%和0.5%
作者通过流式分选了EG7中的CAF、CD3+T和CD11b+髓系细胞，应用HPLC定量分析了CD73活性，作为评价生成ADO能力的指标。作者在CAF中加入100UM的AMP,EG7-CAF在4小时内产生近100UM ADO,CD73抑制剂可以逆转该过程。从相同的TME中纯化的相同数量的CD11b+或CD3+细胞产生<5μM ADO，AMP-CAF条件培养液显著抑制了T细胞增殖。
尽管EG7-CAF和人CRC CAF在肿瘤类型和种类上存在差异，但推测它们除了CD73表型外，还有许多相似的细胞和分子特征，并因此比较了它们的转录组特征。基因集富集分析(GSEA)表明，与细胞因子-细胞因子受体信号转导和细胞外基质相关的基因在EG7-CAF中高度富集(图3B)，这与它们的免疫调节功能和参与组织重塑的作用一致。
EG7-CAF
细胞因子/趋化因子和信号分子，包括各种白细胞介素(IL)、IL-受体、下游转录因子、CCLS、CxCL、TGFs、JAKS、Stats和SOCS3，在CAF中高度升高(图3C)。同样，与细胞外基质、缺氧和嘌呤代谢相关的基因，如COLS、MMP、HIF1α、EPAS1(HIF2α)、NT5E(CD73)和Entpd2(Cd3911)，在CAF中与MSCs相比高度上调(图3D-f)。值得注意的是，用于定义CAF的常见标记，包括PDGFRA、PDGFRb(图3C)、Acta2、DES(图3D)、Fap、Postn和Thy1(图3e)，在CAF中的表达水平都高于MSCs
然后，作者又分析了CRC-CAF,这次作者用的是GEO数据分析的。不说了，明眼人一看就明白。
作者紧接着评估了CD73对于肿瘤的影响，一波动物模型验证验证。可见CAF含量是没有改变,但是免疫细胞在实验结束发生改变。CD73缺失会促进CD8+T细胞浸润，并且会促进CTL功能。又是免疫。CAF如果不表达CD73那么他会起到抑制肿瘤的作用。
作者作了双向的骨髓移植，这个我们之前很多文献都说过这个问题了，可以这么说，只要做到免疫，这个不是必须那也是多少要沾边的。通过放射辐照致死然后转移骨髓到实验鼠中，观察表型恢复情况，从而探讨CAF与免疫细胞的关系。通过下图也就看出了其实这种肿瘤抑制效应是肿瘤浸润CAF发挥的，通过CAF产生ADO，抑制CD8+T肿瘤浸润，从而促进了肿瘤生长。
CSFE是用来检测CD8+T活化的指标
表型也有了，接下来就是机制问题了。作者发现肿瘤越大，CAF越多，CD73也随之增多。在EG7进展过程中观察到肿瘤缺氧和坏死/凋亡的进行性增加，作者进一步进行了缺氧环境构建，发现NT5EmRNA和表面CD73的表达都没有增加，尽管它们明显上调了缺氧相关基因，缺氧诱导因子1α(HIF1α)和VEGFA。
肿瘤缺氧诱导的细胞死亡导致TME细胞ADO升高，然后在ADO存在的情况下培养CAF，这在24小时内显著增加NT5E的表达。不同亚型的腺苷能受体是组成性的，但在不同的组织中有不同的表达，作者的RNAseq结果表明，Adora2a(A2a)和Adora2b(A2b)是成纤维细胞间质表达的主要亚型。RT-PCR显示T细胞主要表达A2a，而几乎检测不到A2b，而CAFs和MSCs优先表达的A2b比A2a高10-50倍。其实亚型也很重要的，越是高分文章对这个亚型的要求越高。
用ADO分别在A2A或A2B拮抗剂ZM241385(ZM)或PSB1115(PSB)存在下处理EG7-CAF，结果表明A2B而不是A2A拮抗剂能阻止ADO诱导的CD73上调，与赋形剂对照组相比，每天注射PSB1115的携带EG7的WT小鼠体内治疗显著抑制CD73+CAF约50%，而不影响CAF的丰度，加了不同的拮抗剂会不会对作者索要研究的免疫细胞有影响呢？，作者在补充材料里也验证了这么一个问题，但是并没有影响。估计也是做得流式看看CD4+T细胞的含量吧。
前文说到缺氧并不是CAF产生CD73的原因，作者接下来就开始找CD73增加的原因了，这里还是要从ADO下手，治疗诱导的细胞死亡和组织损伤导致与大量ATP释放和转化相关的EADO水平显著升高，作者推测这可能是化疗和放疗通过激活ADO-CD73轴来激活CAF以增强其亲肿瘤和免疫抑制功能的机制之一，通过对GEO数据库挖掘接受放射治疗的患者TME中的NT5E水平明显高于没有接受放射治疗的患者。在此之前，作者发现瘤内(I.T.)。向EG7肿瘤注射p53激活剂Nutlin-3a(Nutlin)可诱导TME内的局部细胞死亡。在这里，证明了Nutlin治疗有力地增强了CAF-CD73的上调，这可以通过在Nutlin注射期间进行PSB治疗来抵消(图5H)。
至此作者得出了一个轴 ADO-A2B-CD73-ADO，奇怪不奇怪。这不就是永动机了吗？然后作者通过抑制A2B检测治疗效果怎么样。当然，还是EG7那个细胞。
发现了什么没有，其实虽然用了CD73抗体，但是，并没有对肿瘤抑制起到太大作用，反而是抑制了两个受体作用更大，为什么？因为作者也说了CD73其实在免疫细胞中也是有表达的，用CD73抗体机会完全拮抗了CD4+T细胞。用了拮抗剂并没有减少CAF的总量，联合应用CAF-CD73hi含量和肿瘤大小呈相关性。我觉得作者应该研究研究这个A2A在免疫细胞中高表达对你用这个拮抗剂到底有没有影响。
基于上述这么好的结果，作者趁热打铁，作了MC38，但是，却没有得到一致结论。MC38-CRC表达高水平的CD73，而低CAF丰度。
发现了什么兄弟们，只有加了CD73抗体，以及联合应用才显示出抗肿瘤效应，但是对CAF作用并不明显，说明可能是CD73抗体对肿瘤直接杀灭作用或者通过激活免疫过程发挥的效应。然后进行了一波MC38的研究。这个和前面说的不一样啊。其实药物显示出来的是对肿瘤的直接杀伤效应，并非是主要针对CAF的。
如果我做到这儿，我估计都可以结束了，毕竟图够了，也说明了一些问题了。作者不死心啊，如果肿瘤中没有CAF那么在用这些药物会有抗肿瘤效应吗？作者真调皮。是不是MC38高表达了CD73才造成的这种治疗效果不理想。作者把MC38敲CD73得到MC38Cd73KO单细胞克隆，发现MC38Cd73KO在WT小鼠中的肿瘤进展与未经修饰的MC38肿瘤和修饰表达RFP的MC38(MC38-RFP)相比显著延迟。这个和CD8+T浸润增多有关，但是加入CD73抗体后肿瘤生长是受到抑制的，所以，CAF还是提到作用的。我有个大胆的想法，给肿瘤来点CAF让他CAF丰度高点，会不会好点。
我有个大胆的想法，给肿瘤来点CAF让他CAF丰度高点，会不会好点。果不其然，作者真是怎么干的，而且效果不错，所以这种抗肿瘤效应需要CAF的丰度足够高才行，研究CAF的同学们，赶紧把你们手里的丰度测测吧，顺便也看看有没有借鉴的地方。
好文分享结束了，总体上说，还不错，有一些思路和方法其实挺好的，不难理解的一篇文章，我猜作者应该是搞临床的，要不然不会这个机制就做这么点东西。欢迎批评、指正。
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