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基因表达调控—四环素诱导系统简介

基因表达调控—四环素诱导系统简介

作者: HyCyte海星 | 来源:发表于2023-08-31 16:07 被阅读0次

四环素诱导表达系统是一种基于大肠杆菌的Tet抗性操纵子所建立的用于诱导基因表达的调控系统,也被称作Tet诱导表达系统。该系统是通过药物改变阻遏蛋白的构像从而调控目的蛋白的表达,详细来说,Tet阻遏蛋白(Tet repressor protein, TetR)能够特异性结合Tet操纵子(Tet operator, TetO),当没有诱导药物存在时,TetR与TetO结合从而阻断下游耐药基因的表达;当有诱导药物存在时,药物使TetR的构象发生改变,从而使其从TetO上脱离下来,使下游耐药基因得以表达,因此细菌获得耐药性。四环素诱导表达系统分为激活性系统Tet-on和抑制型系统Tet-off。

激活性系统Tet-on是当四环素不存在时,下游基因表达关闭;当四环素存在时,下游基因表达开启。而抑制型系统Tet-off与之正相反,当四环素不存在时,下游基因表达;当四环素存在时,下游基因表达关闭。

我们的Tet-On诱导型基因表达载体旨在——当缺乏四环素时,实现目的基因的几乎或完全沉默;当往体系中添加四环素时,目的基因得到快速高水平表达。

优势:

类似开关的严格基因表达调控:只依赖rtTA的Tet-on系统在没有诱导剂的情况下,会有明显的泄露表达。我们的Tet-On基因表达载体可严格调控基因的表达,在没有诱导剂的情况下可将背景泄露表达最小化,并保持该系统对四环素诱导的高灵敏度。

外源基因的永久整合:常规质粒转染只能实现外源基因的瞬时表达,这种外源基因会随着宿主细胞的分裂而不断丢失,在快速分裂的细胞中显得尤为显著。相反,将PiggyBac转座子载体和辅助质粒一起转染到哺乳动物细胞中,由于转座子在转座酶的作用下,目的基因能稳定地整合到宿主细胞的染色体中,从而实现转座子载体上携带的目的基因在宿主细胞中永久表达。

技术简单:常规转染即可把质粒转入细胞,相比起病毒载体需要进行病毒包装,过程更简单。

载体容量非常大:我们的载体总容量可达30 kb,其中质粒骨架和Tet-On元件只占4.6 kb,有足够大的容量可以放置客户所感兴趣的序列。

四环素诱导系统因其强大的基因调控作用受到众多研究者的青睐,海星生物利用二代Tet-ON 系统,将Tet-on系统与Piggybac转座子载体结合,推出基于四环素诱导系统的过表达稳转株构建服务,在减少泄露的同时,可实现大片段的基因组稳定整合,表型稳定,表达效率高,省去病毒包装周期,缩短实验周期的同时实现目的基因的稳定开合。

技术流程

案例: dox诱导后,hKCNH2基因在过表达组中的表达量是对照组的9602.25倍。

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