写在前面
Emmm,毕竟是三天假期嘛,过去很长一段时间积累的一些特性和功能,拿出几个打打GUI,顺便与大伙一同分享,或许还是有点意义。为此,一套组合拳过去,咱们已经更新了 6 个推文(含一个完整已发表BSAseq项目的教程长文 - 正在跑数据)。
早晨过来,发现水壶的电似乎断了,没温水,早餐就先没得吃了。没早餐吃,就没心思干活。
想来想去,不如把昨晚发的朋友圈配图相应教程写一些。
图中实际数据,来源于我大学同学张开京硕博期间的已发表工作。
这个工作很不错,也一下就能重现。前面我给研究生师弟师妹们上课的时候,也用的他的这组数据。我是从 NCBI SRA 数据库中下载的。他的定位结果如下,
使用「QTLseqr GUI Wrapper」
首先是安装这个插件,注意到,作为一个 R-Plugin,那么在 TBtools 里面,他是依赖于 Rsever.plugin 的。如果你没有安装 Rserver.Plugin,那就到插件商店下载,随后 Install Plugin 即可。
一旦安装了 R-Plugin,后面就可以「为所欲为」。
对于「QTLseqr GUI Wrapper」,你需要做的与其他插件类似,获得这个「Plugin」之后,直接 Install Plugin 就可以了(PS: Windows 和 MacOS 插件分开)。直接安装就可以使用了,不再需要以前的MetaPackage注入。
安装完成,打开界面如下
使用简单,我们直接用前面重测序软件「三兄弟」教程出来的 .vcf 文件。
将这个文件拖拽放置进去,会自动弹出窗口。参考对应样品名字,我一般是直接 cp
设置一下输出目录
点击「Start」摁钮即可。
这个过程需要 2~3 min,毕竟还是有一些位点。输出结果如下
其中,文件信息不同:
- TBtools_QTLseqR_SNP.table,这个文件不用看,主要是做了格式转换
- nSNPs.pdf,这个PDF可视化了SNP在全基因组水平的密度信息
- Gprime.pdf,这个PDF可视化了全基因组水平 G' value 的计算结果,具体可参考「QTLseqr」的文稿
- deltaSNP.pdf,这个大伙最喜欢...delta SNPindex, 不做说明
- negLog10Pval.pdf,全基因组水平的滑窗 pvalue 可视化
- TBtools_QTLseqR_BSA_QTL.csv,这个表格重要!详细记录了具体可能的QTLs信息
整体结果如下
Emmm,看结果,咱们过滤的还是狠了一点,不过影响不大。狠一点好。不过整体上,咱们基本可以判断,大概在 Chr03的38Mb前后,参考表格来就行了。对照一下发表的文稿
恩,还是准确。考量到,咱们只抽了20M的PE Reads,而实际上原文测了 70M 的PE Reads,这个示例数据没有那么精确,那么也合情合理。按照前一个推文的经验,其实20MPE两个样品要24小时,70M,大概就要跑 3 天了。当然你有更好的PC就不好说了(毕竟我的是 2016年1w块的组装机器)。除了比对,剩下的,都不是问题,可以很快完成。若是用上完整数据集,结果直接看开篇的图即是。测序深度还是重要,可能混池个体每个只覆盖到1X可能还是少了点,但也不是不可以,对吧。哈哈
注意到,其中「Target Chr」是有用处的。因为有一些物种的染色体组装结果太碎了,我们可以参考刚才的弹出窗口信息,只做指定的 Chr 的 QTLs 检测(比如只看 Chr 水平的,Scaffold 和 Contig 水平的就不看)。此处,咱们只检测 3 个Chr
,包括 Chr03。
看看效果
写在最后
整完收工。做你觉得对的事情,尽管有些人看不上,有人不认可,还有一些人阻拦。
很多问题,不用急于回复;
时间会给出答案。
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