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CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 16-17 转染

CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 16-17 转染

作者: 冻春卷 | 来源:发表于2019-03-16 20:09 被阅读0次
    基础知识系列链接(节选):

    CRISPR-Cas9学习笔记
    Cre-LoxP条件性基因编辑系统--学习笔记
    FLP-FRT系统--诱导性基因编辑inducible gene editing

    系列实验链接:

    CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计
    CRISPR-Cas9(三)--sgRNA设计好之后
    CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 1
    CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 2
    CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 3
    CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 4
    CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 5-15 转染验证

    本期实验

    上次我们提到需要将构建好的质粒,通过脂质体或者其他方式转染到293T细胞中进行验证,在经过一阵摸索之后,得到了>70%的转染效率之后,我们需要将基因组DNA提取出来。emmm因为实在是太累了,且文字描述的理解力远不如图片,做了一张这样的图。


    Snipaste_2019-03-16_20-07-15.jpg

    其实这张图才是一直以来的精华所在,简洁的告知了思路,并且有会用到的实验技术以及预期的实验结果,这对什么都不明确的人来说,还是很重要的。

    最后的T7 Endonuclease I digestion应该还要通过条带灰度值计算一下剪切效率的。

    感谢师兄DZ

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