Results 5

前文已经说明DET 1和COP10作用于正负调控种子萌发的蛋白PIF1的上游，我们在此介绍其调控机制。运用酵母双杂交很容易看出PIF1与两者有直接作用，并且发现其与PIF1的结合区域与和之前HFR1的相同，都位于氨基端的26到87氨基酸残基。运用BiFC和LCI技术在植物细胞的进一步研究表明，在细胞核处其与两者有强烈结合，并都能表现高荧光素酶活性。

  与之前报导光抑制PIF1分解一致，我们发现其在暗环境下累积，而在红光下含量极少。非常明显的是，在DET1缺失条件下，即便是暗培养的种子，其PIF1水平急剧下降。我们再进行无细胞降解实验以进一步说明PIF1降解机制。在D4条件下的野生型种子的提取物中加入纯PIF1，2h内很稳定。而在DET1和COP10-4缺失体中则急剧下降，甚至快于红光处理的野生体。另外，MG132处理可以将DET1突变体中PIF1降至正常野生水平。

  因此，得出，DET1通过阻止26 S蛋白酶体介导的PIF1降解来稳定PIF1蛋白。