Q30为何物?
Q30:测序时每个碱基都会有质量值,如碱基质量值为20则表示该碱基的错误率为,10^(20/(-10))=0.01=1%(根据Q=-10lgP计算)
行业中,为了评估下机reads测序的准确度,我们会评估Q20或Q30(及所有碱基质量值大于20或30所占的比例),一般合同中要严格保证Q30至少达到85%。
测序步骤
华大智造测序仪采用先进的 DNBSEQTM 测序核心技术,通过仪器气液系统先将DNA纳米球(DNA nanoball,DNB)泵入到规则阵列芯片(Patterned Array)并加以固定,然后泵入测序模板及测序试剂。测序模板与芯片上的 DNB 的接头互补杂交,在 DNA 聚合酶的催化下,测序模板与测序试剂中的带荧光标记的探针相结合。然后由激光器激发荧光基团发光,不同荧光基团所发射的光信号被相机采集,经过处理后转换成数字信号,传输到计算机进行处理,可以获取待测样本的碱基序列信息。(华大智造官网文档彩页DNBSEQTM 测序平台-表观遗传学研究)
华大基因测序芯片的规则阵列(PatternArray)采用先进的光刻和干法刻蚀技术,在硅片表面形成阵列和对准标记,通过“涂敷深紫外光刻胶--阵列图案曝光—显影暴露局部硅表面—汽相沉积(氨基硅烷修饰)”系列处理,来实现DNA纳米球的固定。硅片最后被分切成25mmX 75mm的小片,成为测序芯片的基底。(链接:https://www.jianshu.com/p/8289f1cc5dd7)(华大智造官方视频:华大基因DNBSEQTM测序平台技术原理)
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