2022-09-27 OT1 小鼠鉴定 2

这是师弟第一次做的OT1小鼠鉴定的结果，用的是维赞的带染料的酶，退火温度不详。

image.png image.png
有几个样本是一致的，但是两次结果不一样。

听了孙老师的建议，换成Takara R045的酶，20ul体系

mix 10ul

引物1 0.5ul

引物2 0.5ul

引物3 0.5ul

引物4 0.5ul

H20 5

模板 1ul

image.png

我建议将引物浓度提高，结果是这样的：

image.png

---

条带逐渐离谱，而我自己不清楚原因，于是让曾老师把样品寄给我，他寄给我的时候，有5只是当天剪完，煮好样送给我，发的顺丰快递给我，上午拿到快递，就做上pcr，然后跑DNA胶。

image.png

从这个图中可以得出以下几个经验：

• 1. 每一种酶都有自己最适合的工作温度，比如退火延伸等温度时间，不能直接套用；
• 2. 对于OT1这种鉴定，对于小鼠尾巴的DNA质量的要求较高，最好是当天剪完处理好，立马把PCR做上，其他loxp可能不需要，隔几天做问题不大；
• 3. 这种转基因小鼠鉴定，除了wt对照外，还需要做H2O的对照；
• 4. 即使做的不对时候，如果是一样的试剂，作出的不对的结果应该是一致的。如果做的好几次不对的结果，也都不一样，就像曾老师前几次，每次结果都不一样时候，真的很令人抓狂。后面用的takara时候，我隐约觉得像那么回事，但是又和我自己做的不一样，考虑拍照的仪器或者系统本身（小鼠DNA不行），而不是考虑鉴定方法的问题。
• 5. 一步步找到问题原因的过程很爽，但是也费时间和精力。