单细胞解离的实质

通过破坏掉细胞间隙中维系细胞关联的蛋白质，使细胞分离开来。在动物细胞解离单细胞中通常采用胶原蛋白酶和胰蛋白酶来处理组织，从而分离成单个细胞，制成单细胞悬液。

动物细胞的基本特性

1. 相较于植物细胞，动物细胞没有细胞壁较为脆弱；

2. 动物细胞的体积稍小于植物细胞的体积；

3. 动物细胞的直径一般在10μm-30μm；

4. 大部分动物细胞在肌体内相互粘连以集群形式存在。

单细胞解离步骤

1. 查询文献资料查找此次实验对应样本处理方案；

2. 接收样本，确定样本寄存状态；

3. 组织解离器械的准备；

4. 清洗组织多余血块；

5. 根据样本对应的消化方案进行消化，加入对应的酶及培养基溶液；

6. 每隔一段时间观察对应细胞数量，细胞数量较多时终止；

7. 离心收集细胞；

8. 去死，去碎片，裂红等处理（根据细胞数量及细胞状态确定是否要进行相应操作）；

9. 细胞计数仪进行数据统计。

单细胞悬液制备步骤

1.组织保存

新鲜样品需储存于组织保护液中，并在48小时内解离。

2.组织剪切和清洗

需将样本表面的血污清洗干净；组织尽量剪碎，使之充分与酶液进行消化。

3.组织解离

加入对应的酶之后放入37℃水浴锅中进行酶解；若样本比较难消化，可提高消化时间或酶液浓度。（不同物种、不同组织类型需要的酶种类、浓度、消化时间各不相同，需对特定组织个性化定制解离方案）

4.计数

AOPI染色后Ccountstar计数仪进行计数及统计。

解离小问题应对策略

1.现象：剪碎的组织在消化过程中出现溶液胶状，组织块分布在整个体系中，无法沉于底部；

建议：可以加入适量的胶原酶II消化0.5-1小时。

2.现象：镜检下的细胞仍存在细胞间交联的情况；

建议：可加入适量的DNA酶（可将包裹细胞的基因组进行酶解切断，可改善部分细胞交联现象）。

3.现象：待解离组织块小；

建议：可采取1.5ml离心管进行消化（使酶充分接触组织、减少试剂用量）。