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从微量细胞中提取基因组DNA

从微量细胞中提取基因组DNA

作者: 小姐姐爱跳舞 | 来源:发表于2019-10-13 14:59 被阅读0次

    介绍 BIOG Microdose Cell DNA Mag-B Kit是我公司研发的专门用于从微量细胞、组织样本中提取DNA的试剂盒。在有些试验中,样本的获得很不容易,样本量很少,用一般的试剂盒很难获得理想的DNA。BIOG Microdose 采用独特的消化液消化组织、细胞中的蛋白质,使样本DNA的释放更加充分。试剂盒采用了最新的离子膜技术并反复优化了裂解液和洗脱液配方,使样本中的微量核酸能够被充分地提取出来。与一般的核酸提取试剂盒相比,BIOG Microdose 在微量组织或细胞样本中的DNA提取得率显著较高,纯度较好,可以直接应用于PCR、荧光定量PCR、分子杂交和一些酶切试验等。

    特点

    ◎采用最新的离子膜技术和独特的裂解液配方,DNA提取得率高,特别适用于微量组织或细胞样本的DNA提取;

    ◎操作简便快速,可在20分钟内完成提取过程; ◎提取DNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.7-1.9。

     操作步骤:

     1. 请自行准备:无水乙醇、生理盐水及1.5mL离心管。

     2. 取出洗涤液,按70%比例加入无水乙醇, 9mL加入21mL无水乙醇,18mL加入42mL无水乙醇,混匀。

     3. 样本处理: 3.1 微量组织:a)活检、冰冻组织,先用液氮研磨为粉末,转入1.5mL 离心管内,加入100 μL 生理盐水,混匀,进入步骤4; b)穿刺组织,体积小于50μL,加入50 μL 生理盐水,转入1.5mL 离心管内,混匀,进入步骤4;50-100 μL穿刺液,混匀,直接进入步 骤4;大于100 μL,2000rpm离心5分钟,吸弃部分上清,留下100 μL上清,振荡混匀,进入步骤4。 3.2 微量细胞:a)胸腹水、尿液、脑脊液等,2000rpm离心5分钟,吸弃部分上清,留下100 μL上清,振荡混匀,进入步骤4。 b) 培养细胞,先制备成细胞悬液,转入1.5ml离心管,2,000 rpm 离心 5分钟,弃部分上清,留100μL 上清,混匀,进入步骤4。

     4. 加入200μL裂解液,20μL消化液,4μLcarrier,振荡混匀,56℃温育10 分钟至细胞完全裂解。

     5. 加入350 μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。

     6. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

     7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。

     8. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,离去残留的洗涤液。

     9. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-50 μL 洗脱液,静置2分钟,12,000 rpm 4℃ 离心1分钟,收集DNA溶液。提取 的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

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