wb时连成一条线可能有以下几种原因：
1）上样量过大 这里指的是质量数过大，一般上样在20-100ug之间就可以，楼主可以减半上样量，试试看。
2）一抗孵育时间过长，适当缩短孵育时间，也可以改善。
3）一抗浓度过大 ，抗体如果很好用的话，增大稀释比例试试。
4）曝光时间过长，同样会由此现象。
但是这其中，上样量影响最大，建议楼主其他条件不动，减少上样量试试，可以减少一半。
按照自己具体实验经验调节。
解决方案如下:
1.检查用的胶的浓度和靶标蛋白的分子量是否适合
2.上样量过高，有的人怕蛋白太少，蛋白浓度又低，蛋白加的太多，一般上样量20-25ug即可
3.样品离子浓度高
4.拔完梳子后，加样孔有残留的胶，这样上样量就少了，因此建议，拔梳子后一定要用水把残留的胶冲净，但也要注意，水一定要吸干，否则和残留胶一样会导致同样的结果。
5.拔梳子时不要左右摇动，避免破坏加样孔底部。
6.上样要迅速，否则会引起样品扩散。
7.上样与跑电泳之间的间隔太长,尽量缩短时间间隔。
8.装配三明治结构要迅速。
9.电泳的电压太高，发热导致扩散。
10.降低一抗浓度。
11.可以适当缩短曝光时间。
12.10%APS现配现用,APS长期存放也会引起同样的问题。
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