美文网首页
western-blot化学发光时,出现非特异条带,该怎么办?

western-blot化学发光时,出现非特异条带,该怎么办?

作者: 实验小助手 | 来源:发表于2023-06-13 13:16 被阅读0次

    出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面:

    1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。

    2. 一抗是多克隆抗体,或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体,或降低抗体浓度,缩短抗体孵育时间,优化一抗和二抗的使用浓度。

    3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量,延长洗膜时间,或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20。

    4. 目的蛋白在体内存在多种修饰形式,如乙酰化,甲基化,磷酸化,糖基化等。可查阅文献,用合适的方法去除蛋白的修饰,或选择合适的抗体。

    5. 目的蛋白降解。重新准备蛋白样品,并加入足够的蛋白酶抑制剂。

    6. 发光液质量问题,可选用发光清晰的ECL发光试剂,如Enlight发光液等。

    相关文章

      网友评论

          本文标题:western-blot化学发光时,出现非特异条带,该怎么办?

          本文链接:https://www.haomeiwen.com/subject/kfucydtx.html