本文是我的毕业答辩演讲稿，因此专业性较强，欢迎生物领域的前辈批评指正，007战友可不比过多点评~
尊敬的各位老师，你们好！我是动科154班的侯雪晗，我的论文题目是《RNA干扰ANP32A对鸡马立克氏病肿瘤细胞生长的影响》。这篇论文是在连老师的悉心指导下完成的，在此，我想对她表示最诚挚的感谢。
研究背景
接下来我将就这篇论文的研究背景、实验过程以及实验结果等五个部分向各位老师作出简要的陈述，恳请各位老师批评指导。
首先，我对本实验的研究背景从以下几个层面做简要的概述。
鸡马立克氏病是目前危害家禽业的三大疫病之一。（除此之外还有:鸡新城疫、鸡传染性法氏囊病）。
它的主要特征是身体多各部位出现淋巴细胞肿瘤。
致病病原是α疱疹病毒亚科的马立克氏病毒MDV。其抗原性质可分为三种类型，所有致瘤的马立克氏病毒株均属于1型；其他两个类型无毒力、无致瘤性。（2：家鸡，3：火鸡。）
同时，值得关注的是，近年来MDV流行毒株出现毒力逐渐增强的趋势!
MD的传播方式是通过呼吸道传播，往往幼龄鸡更容易被感染。
MD临床症状共有四种，
第一种是内脏型；多以内脏肿瘤为特征，在心脏肝脏、肺脏表面等部位出现肿瘤结节。脾脏会肿大数倍，卵巢肿大呈现菜花状等。
第二种是神经型，坐骨神经受侵鸡会出现瘫痪、大劈叉、爪弯曲等现象。臂神经受侵鸡会出现翅膀松弛无力、下垂的现象。颈部神经受侵：病鸡脖颈会斜向一侧。
第三种是皮肤型，特点是体表毛囊腔出现灰黄色的肿瘤结节，(突出于皮肤表面，有时破溃)。
最后一个类型是眼型，病鸡视力下降乃至失明，虹彩消失，瞳孔边缘不整齐。
目前的防病措施主要以疫苗接种为主，但不容忽视的是，由于这些原因，鸡群免疫接种后仍有可能暴发MD。
microRNA是一种具有发夹结构的小RNA，可以参与转录后基因表达调控。
有人形象把microRNA的功能比喻为：基因表达的微调器、电阻以及变阻器，
如图，是因为它可以维持全身基因表达的稳态、抑制基因表达、且抑制效果可以调节，从而参与生命活动的一系列过程。
miRNA-181是181家族成员之一，其中181a在在各种生理过程和病理过程中起重要作用。
根据研究表明，它可以抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、促进细胞分化。
它在肿瘤疾病的发生、转移、诊断以及预后过程中也起重要作用。
此外，它还参与免疫细胞的增殖分化过程、免疫应答、耐受、炎症发生等过程。
ANP32A 是酸性核磷酸蛋白32家族中的成员之一，在细胞增殖、凋亡、转录调控、信号转导等多种生命过程中发挥重要作用。
ANP32A 蛋白形似一个蝌蚪，由一个球形氨基端和一个伸展的羧基端组成，且含有一个核定位信号，这些特点使 ANP32A 蛋白可以参与多种生物学过程。
据前人研究表明，它参与多种肿瘤的发生与发展，有正调节和负调节的作用；除此之外，它还参与神经系统发育，调控神经元分化…
RNA干扰技术也就是转录后基因沉默现象，可以使目的基因不表达或表达水平下降。它用于癌基因与抑癌基因的敲除，在肿瘤研究领域被广泛应用。
综上所述，MD严重危害养殖业，但接种疫苗仍不能完全预防鸡马立克氏病的发生。
miRNA与肿瘤增殖、分化、迁移、侵袭以及转移过程密切相关。在本实验室前期证明miRNA-181a与鸡马立克氏病肿瘤形成相关，并抑制MSB-1细胞增殖和迁徙。
其中，ANP32A是miRNA-181a的下游靶基因。并且可以利用RNAi敲低ANP32A基因的表达。
因此，本研究目的是探究RNA干扰ANP32A表达后对MSB-1细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。
试验过程与结论
针对ANP32A基因，我们一共设计了3条siRNA【沉默RNA】。对MSB-1分别细胞进行转染后，在转染24、48和72小时收集细胞提取RNA，定量检测其干扰效率。
结果如图所示，siRNA明显干扰了基因的表达，我们选取了两个表达量下调较高的沉默RNA进行后续试验。并设置空白对照组。
我们利用CCK-8法检测细胞增殖情况，与对照组相比，利用RNA干扰降低ANP32A基因的表达后，MSB-1细胞增殖无显著影响。
我们利用流式细胞仪检测细胞周期，与对照组相比，利用RNA干扰降低ANP32A基因的表达后，对MSB-1细胞周期的各个时相均无显著影响。
同样，我们利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，与对照组相比，利用RNA干扰降低ANP32A基因的表达后，对MSB-1细胞凋亡受到抑制。
试验讨论
前人的研究结果显示，ANP32A对细胞增殖无影响；本研究中也无影响。前人研究结果显示，ANP32A会阻滞细胞周期，进而影响细胞生长过程，但本研究结果不同，ANP32A对细胞周期无影响。前人研究结果显示，ANP32A会促进细胞凋亡，与本研究结果相符。
展望
目前，马立克氏病对家禽业仍然会造成一定程度的经济损失，虽然使用疫苗对MD有一定的控制作用，但疫苗的使用对病毒毒力的进化有潜在推动作用。
要让畜禽疾病得到更好地防治，除了疫苗的研发使用，从遗传角度出发也是一个重要手段。***
因此，揭示宿主本身的抗性、易感因素为鸡马立克氏病的防治提供了一条新思路。
致谢
最后，再次感谢连老师和师姐对本研究的悉心指导，以及各位老师的耐心聆听。由于对遗传见解深浅，本文仍存在许多不足和缺陷，还请各位老师批评指正。
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