三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤（Tetrastigma Hemsleyanum. Diels et Gilg）的块根或全草,主要分布于长江以南各地,全草含有槲皮素山柰酚、山秦酚-3-新橙皮糖苷等多种黄类化合物,具有清热解毒、酒血风的功效,民间用于治疗黄疸及急慢性肝炎有较好的疗效。
本研究旨在观察三叶青对大鼠慢性肝损伤的保护作用。
1、实验材料
1.1动物
sD大鼠,体质量70-90gn雌雄各半,由上海「斯莱克实验动物责任有限公司提供,生产许可证:SCXK(沪)20003京中医药大学,实验动物使用许可证:SCXK(苏)200053
1.2药品与试剂
三叶青,丙氨酸氨基传移酶(ALT)试剂盒Vnitech sciences INC,U.S.A.批号：103302 ；天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒, Vnitech sciencesNC,U.S.A,批号101024，白蛋白(ALB)试剂盒Vnitech sciencesNC,U.S.A.,批号:101024;总蛋白(TP)试剂盒, Vnitech sciences INC,,U..A,批号:101024;透明质酸(HA)试剂盒(美国 PowerTech公司）批号号:020705;粘连蛋白(amin,LN)试剂盒,上海海研医学生物技术中心,批号:200512，四氯化碳(CCL4),化学纯,上海长江化工厂,批号950205，橄榄油，化学纯，,南京化学试剂厂,批号960806,齐墩果酸粉,贵阳制药厂,批号:050406用前以2%吐温-80配置成混悬液。
1.3仪器
yital-200,全自动生化分析仪,荷兰威图科学仪器公司;奥林巴斯显微镜,日本。
2、方法
2.1分组给药
取健康SD大鼠96只雌雄各半,随机分成6组每组16只。6组分为:①正常组:给予等容积蒸馏水;②模型组:给予等容积蒸馏水;③三叶青低剂量组,给予三叶青1g/kg体质量;④三叶青中剂量组,给予三叶青2g/kg体质量:⑤三叶青高剂量组,给予三叶青4g/kg体质量;⑥阳性对照组,给予齐墩果酸80mg/kg体质量。各组均灌胃给药,每日给药1次,连续给药8周。
2.2大鼠造模及观察指标
于实验d1,除正常组外,其余各组均皮下注射30%CCL4橄榄油,以后每隔3-4d皮下注射CCL40.3mL/kg体质量,连续注射3个月。各组均于造模第个月末开始给药,每日1次,连续给药月。于第3个月未,各组动物眼眶取血,进行各项指标检测。
3、结果
3.1对C4所致慢性肝损伤大鼠存活率的影响大鼠经CL4造成肝损伤后3个月内,各造模组动物均出现不同度的死亡。三叶青3个剂量组大鼠存活率均高于模型组,其中三叶青高剂量组大鼠存活率与模型组相比,有显著性差异,提示三叶背可以提高造模大鼠的存活率。结果见表1。
3.2对大鼠血清ALT、Asr、T-Bi水平的影响
大鼠经CCL4造成慢性肝损伤后,肝功能出现明显的异常,模型组大鼠血清AST、ALT及TB水平均高于正常组,与正常组相比,均有显著性差异。三叶青3个剂星均能明显降低造模大鼠的异常升高的血清 AST ALT和TB水平,其中商中剂量组大鼠血清As、,AT及TB1;,与模型组相比有显著性差异。表明三叶青具有一定的保肝降酶作用,结果见表2。
3.3对CCL4白蛋白含量、白蛋白/球蛋白比例的影响
大鼠经CCL4造成慢性肝损伤后,血清总蛋白白蛋白含量和白蛋白、球蛋白比例明显下降。三叶青3个剂量组大鼠血清总蛋白和白蛋白均高于模型组,与模型组相比,均有显着性差异。三叶青高剂量组大鼠血清白蛋白/球蛋白高于模型组,与模型组相比有显著性差异。表明三叶青可阻止造模大鼠血清总蛋白白蛋白的含量下降以及纠正造模动物血清白蛋白/球蛋白比例失调,结果见表3。
3.4对血清HA、IN水平的影响
模型组大鼠血清HA、LN含量明显升高。高、中剂量组大鼠血清HA和3个剂量组血清IN含量均低于模型组,与模型组相比,有显著差异,表明三叶青具有降低造模大鼠血清HA水平作用。结果见表4
4、讨论
1.1 CCL4对肝毒性损伤主要是由于，经肝细胞微粒体细胞色素代谢裂解成三氯甲基自由基(CCL3),CCL3-可进一步氧化反应形成具有更强活性的基团,从而产生脂质过氧化作用,破坏肝细胞的膜性结构,此损伤不断反复,继之有肝细胞坏死、炎症激活肝脏内kper细胞、内皮细胞等,使其释放各种细胞因子,细胞因子进一步激活静息状态的星状细胞使之转化为肌成纤维样细胞(MBLC),MBC过度增殖,同时大量合成各种细胞外基质(ECM),过度沉积而导致肝纤维化。本实验结果显示CC所致慢性肝损伤时,大鼠血清AIT、 AST. HA, IN水平均升高,TP、ALB水平和AG均降低。
1.2 本研究结果表明,三叶青可降低造模大鼠血清ALT、AST、HA、IN及TB水平,抑制造模动物血清TP、AIB水平及AG下降和提高大鼠存活率,提示三叶青具有良好的保肝降酶作用。HA是由间质细胞合成的一种大分子葡萄胺多糖,是结缔组织基质的主要成分,是反映内皮细胞功能和肝硬化程度较为敏感的指标。其血清测量值改变与肝纤维化正相关,反映已生成的纤维化程度,即肝病变程度。是细胞间质的成分之肝、纤维化、肝内炎细胞浸润及肝细胞坏死、变性程度呈正相关,亦与食管静脉曲张呈显著正相关。本研究结果表明三叶青可显著抑制HA、IN的异常增高,提示三叶青具有良好的抗肝纤维化的作用。
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