美文网首页
血液提取RNA

血液提取RNA

作者: 杏子柠檬茶 | 来源:发表于2019-09-28 22:55 被阅读0次

需要准备的试剂:TRIzol(主要成分是苯酚)、氯仿(酚:氯仿:异戊醇=25:24:1)、异丙醇、80%酒精(用RNase-free ddH2O配制)、RNase-free ddH2O。

实验流程

一、样品预处理(Sample Pretreatment)

①1毫升全血+1毫升RNase-free ddH2O。

②RNA血液保存液12000rpm离心5min,弃上清后加1毫升RNase-free ddH2O。

③200微升全血+1毫升RNase-free dd H2O。

④500微升全血+1500微升TRIzol(样品体积的3倍),彻底混匀。

所有样品在15-30℃放置5min。①②③样品在4℃下,12000rpm离心10min。

二、匀浆处理(Homogenization)

①②③弃上清后加入1毫升TRIzol,混匀。将①②③④样品在室温下放置5min。在4℃下,12000rpm离心10min。取上清至新的2毫升离心管中,加入2倍体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),剧烈震荡15s,室温放置3min,使其自然分相。

注:加入TRIzol后,如不需后续实验,可将样品放至-70℃长期保存。

三、RNA沉淀(RNA Precipitation)

1.在4℃下,12000rpm离心10min。

注:样品会分三层:黄色的有机相,中间层和无色的水相。RNA主要在水相中,把水相转移至新管中。不要吸取中间界面,否则将导致RNA样品中有DNA污染。

2.吸取上清至新的离心管中,加入等体积的冰异丙醇,室温放置20-30min。在4℃下,12000rpm离心10min。RNA沉淀于管底。

四、RNA漂洗(RNA Wash)

1.弃液体,加入与TRIzol相同体积的80%酒精(用RNase-free ddH2O配制),缓慢的上下颠倒,悬浮沉淀,

2.在4℃下,12000rpm离心3min。弃液体,室温放置30min(液体蒸发完即可,不宜放置太久,RNA样品过于干燥会很难溶解)。

五、溶解RNA(Redissolving the RNA)

沉淀中加入30-100微升RNase-free ddH2O,用枪头吹打混匀。-70℃长期保存。

相关文章

  • 血液提取RNA

    需要准备的试剂:TRIzol(主要成分是苯酚)、氯仿(酚:氯仿:异戊醇=25:24:1)、异丙醇、80%酒精(用R...

  • 实验1:总RNA的提取——Trizol

    实验一:细胞中总RNA的提取及鉴定 一、目的:掌握Trizol提取总RNA的原理和步骤,学习电泳鉴定总RNA的方法...

  • Trizol法提取RNA及RNA纯度判断

    Trizol 提取RNA的步骤和注意事项 提取原理 Trizol可以破坏细胞使RNA释放出来的同时,同时使RNA酶...

  • 番茄根尖RNA提取

    番茄RNA比较容易提取,使用一般的天根的试剂盒就可以提取比较高质量的RNA.植物总RNA提取试剂盒(DP432)

  • RNA提取

    破坏RNA酶活性:异硫氰酸胍,苯酚(蛋白变性),氯仿(除脂)DEPC,焦碳酸二乙酯

  • RNA提取

    核酸(nucleic acid)在生物界中堪称主宰,是一类非常重要的生物大分子,它在生物的繁衍、发育、维持、衰老和...

  • 7.11

    提取RNA,提取蛋白质(MEC2细胞),测RNA的浓度1509.955ng/ul和A260/A280=1.88,...

  • python一次性提取所有RNA的注释文件

    从ensembl下载的人RNA注释文件gtf格式,从里面提取RNA的关键信息:代码如下: 这是提取完成后的表格,R...

  • 荞麦RNA提取

    荞麦是一种含多酚量比较高的植物,一般的试剂盒很难得到较高质量的RNA,从而难以进行后期的qPCR实验。使用TIAN...

  • exoRBase:人类血液外泌体RNA数据库

    导语 exoRBase是从人类血液外泌体的RNA-seq数据分析得出的环状RNA(circRNA),长非编码RNA...

网友评论

      本文标题:血液提取RNA

      本文链接:https://www.haomeiwen.com/subject/lzlxpctx.html